9035-81-8
中文名称
胰酶抑制剂
英文名称
Trypsin inhibitor
CAS
9035-81-8
分子式
NULL
更新日期
2024/08/13 10:40:08
基本信息
中文别名
胰酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂
胰酶抑制剂II-S型
胰蛋白酶抑制剂(利马豆)
胰蛋白酶抑制剂 来源于大豆
胰蛋白酶抑制剂/胰酶抑制剂
胰蛋白酶抑制剂 来源于鸡蛋白
胰蛋白酶抑制剂 来源于牛胰腺
胰蛋白酶抑制剂 来源于火鸡蛋白
胰蛋白酶抑制剂(大豆)(+4℃)
英文别名
iniprolSBTI/STI
contrykal
APROTINIUM
Trypsin inhibitor
Ovomucoid-Agarose
EZNA KIT MICRO RNA
Trypsin Inhibitor So
KUNITZ TRYPSIN INHIBITOR
TRYPSIN INHIBITOR CHICKEN
所属类别
生物化学品: 多肽及蛋白质类: 消化道激素物理化学性质
外观性状本品是从牛胰、肺、腮等组织中提取的激肽释放酶抑制剂,本身不是酶,由58个氨基酸残基组成的碱性多肽,整个分子呈梨形,活性中心为赖氨酸。它能与多种蛋白酶的活动中心竞争一个赖氨酰基而抑制其活动。
本品为白色或微黄色粉末,无臭,溶于水,有可透析性,等电点为10-10.5。对高温、酸、碱和酶都很稳定。在稀酸中加热至100℃,pH12.6时室温放置24h仍稳定,但pH12.8时活力开始下降。在60-80℃能被嗜热蛋白酶消化,其他酶不能使其失活。
本品为白色或微黄色粉末,无臭,溶于水,有可透析性,等电点为10-10.5。对高温、酸、碱和酶都很稳定。在稀酸中加热至100℃,pH12.6时室温放置24h仍稳定,但pH12.8时活力开始下降。在60-80℃能被嗜热蛋白酶消化,其他酶不能使其失活。
储存条件2-8°C
溶解度H2O: >10 mg/mL
形态solution
颜色White to off-white
PH值<7.4
水溶解性Soluble in water (10 mg/ml), phosphate buffers (10 mg/ml), and balanced salt solutions (1 mg/ml).
制备方法
方法1
方法一、牛肺为原料提取、盐析 将新鲜或冰冻牛肺绞碎后,用5倍量水搅匀,2.5mol/L硫酸调节pH为2,搅拌提取8h,过滤,滤渣同法再提取1次,合并两次提取液,每升加硫酸铵277g,用5mol/L硫酸调pH为1.5,放置过夜。
新鲜牛肺(或冰冻[水, H2SO4]→[pH2, 8h]提取液[(NH4)2SO4]→[pH1.5]盐析物
去杂蛋白 将盐析物除去上清液,过滤,滤液用氢氧化钠液调pH至5.5,再每升加硫酸铵255g,搅匀后静置48h,过滤,得盐析物。用9倍量水溶解盐析物,搅拌2h后,置冰箱过夜,过滤,滤液中加入1/20量的三氯乙酸 (50%),速加热至80℃后,即冷却至30℃以下,过滤。
盐析物[(NH4)2SO4]→[pH5.5, 48h]盐析物[三氯乙酸]→[先80℃, 后30℃]滤液
盐析、溶解、盐析 滤液用氢氧化钠(5mol/L)调pH为3,按每升加入硫酸铵610g搅拌使溶解,静置过夜。取沉淀物,用4倍量新配制的pH5.5的 0.1mol/L乙酸钠缓冲液和1倍量0.4mol/L硼酸缓冲液溶解,按每升加入硫酸镁 1050g溶解,过夜,次日过滤,析出盐析物。
滤液[NaOH, (NH4)2SO4]→[pH3]沉淀物[NaAc,硼酸缓冲液,MgSO4]→[pH5.5]盐析物
透析、脱盐、沉淀 加4倍量水使盐析出物溶解,用流动自来水于10℃以下透析24h,加硅藻土过滤,滤液用强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7与强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×7(按201×7树脂:001×7树脂=3:1的比例)搅拌吸附20min,至无硫酸根离子。将树脂滤过,脱盐液(pH7左右)加0.9%氯化钠和1.5倍量丙酮析出沉淀,过滤,滤液再加4倍量丙酮析出沉淀,过夜。然后沉淀用丙酮、乙醚洗涤,干燥。
盐析物[水]→[10℃以下]滤液[阴离子、阳离子树脂]→脱盐液[NaCl, 丙酮]→[pH7]沉淀物
去热原、沉淀、干燥 沉淀物用60倍量80%甲醇溶液溶解,于冰浴搅拌2h,过滤,按滤液体积的1%加30%的氯化钠溶液和5倍量丙酮,沉淀过夜,离心,用丙酮洗涤,干燥,得沉淀物。再用60倍量无热原水溶解,5mol/L氢氧化钠调节pH至11,置冰箱中4d,过滤,滤液用冰醋酸调为pH 4-5后,加入1%量的300g/L氯化钠溶液和5倍量丙酮,析出沉淀,过夜,用丙酮、乙醚洗涤,干燥,即得成品。
沉淀物[蒸馏水,NaOH]→[pH11]无热原液[冰HAc, NaCl, 丙酮]→[pH4-5]成品
方法二、以人尿为原料的人尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)提取法
原料处理、酸化 取新鲜男性尿100L<操作全过程在0-4℃下进行),经双层纱布过滤,用1mol/L NaOH液调节pH至8.5,得白色絮状沉淀物,静置2h,弃去沉淀得上清液,搅拌下缓缓滴加1mol/L HCl调pH4.0,生成细微沉淀,离心20min,除沉淀得酸化尿液。
男性人尿[1mol/L NaOH]→[pH8.5]上清液[1mol/L HCl]→[pH4.0]酸化尿液
吸附、洗脱 取Polyerde Ⅳ500g加入酸化尿液中,搅拌吸附2h,过滤,弃去滤液,吸附剂用常水洗涤至白色,再用2 mol/L NH4HCO3液4L进行洗脱,收集洗脱液。
酸化尿液[Polyerde IV]→吸附物[2 mol/L NH4HCO3]→洗脱液
盐析、透析、浓缩、干燥 将固体(NH4)2SO4加入洗脱液中,达80%饱和度,于4℃下静置4-5h,离心30min,收集沉淀,再将沉淀溶于适量的蒸馏水中,加磷酸盐缓冲液透析至盐除尽,得透析液。将透析液浓缩,冷冻干燥,即得UTI成品。
洗脱液[(NH4)2SO4, 磷酸盐缓冲液]→[4℃, 蒸馏水]透析液[(浓缩,冷冻)]→UTI成品。
应用领域
参考质量标准
▼
▲
原料药
中国药典2000版280页
指标名称
指标
指标名称
指标
效价/≥3.0单位/mg
热原/符合规定
pH值
5.0-7.0
异常毒性
符合规定
降压物质
符合规定
水分
≤6.0%
注射冻干品
中国药典2000版280页
指标名称
指标
指标名称
指标
含量
≥85%
热原
符合规定
pH值
5.0-7.0
降压物质
符合规定
水分
≤7.0%
其他
符合规定
常见问题列表
简介
胰蛋白酶抑制剂(Trypsin inhibitor,TI)是抑制胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶抑制剂,是大豆中主要的一类抗营养因子,它对植物本身具有保护作用,可防止大豆籽粒自身发生分解代谢。大豆胰蛋白酶抑制剂是一种多肽类或是蛋白质,根据氨基酸残基组成及差异性质被分为不同种类。目前从大豆中被分解出且研究较多的胰蛋白酶抑制剂主要有两种,分别为Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(KTI)和Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂(BBI)。![Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 结构 Kunitz型胰蛋白酶抑制剂 结构](/NewsImg/2024-05-12/6385111010939850002001536.png)
KTI由181个氨基酸组成(图1),含有四个半胱氨酸,相互形成两个二硫键,反应中心位于63号精氨酸与64号异亮氨酸之间,KTI主要对胰蛋白酶起到特异性的抑制作用,是主要的胰蛋白酶抑制因子。
![Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂 结构 Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂 结构](/NewsImg/2024-05-12/6385111014306093161462058.png)
BBI含有大量的半胱氨酸,其显著特点是具有两个独立的反应中心(图2黑色部分),一个位于第16号赖氨酸与第17号丝氨酸之间,特异性与胰蛋白酶结合;另一个位于第43号亮氨酸与第44号丝氨酸之间,特异性与糜蛋白酶结合。因此BBI能够同时抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶活性。BBI结构非常稳定,不易通过加热破坏。
钝化方法
1. 热处理 热处理效果受到大豆品种、含水量、加热温度等因素影响。加热不足达不到破坏胰蛋白酶抑制剂活性的目的,而加热过度会使氨基酸,特别是赖氨酸、精氨酸和胱氨酸等受到破坏,还会使多种氨基酸如蛋氨酸、异亮氨酸和赖氨酸等消化率降低。2. 化学处理 化学处理一般都是利用化学物质破坏胰蛋白酶抑制剂的二硫键,从而改变胰蛋白酶抑制剂的分子结构达到灭活的目的。主要采用的化学物质有亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、硫酸亚铁以及一些带有硫醇基的化合物。但用化学法处理后会存在试剂残留,对原料有不良影响。
3. 超声波处理 在超声波场的作用下,使胰蛋白酶抑制剂的分子结构发生改变,从而影响其活性。但是超声设备成本较高,不适合小规模生产厂家使用。同时,产生振动也会导致一部分蛋白质变性,降低整体营养价值。
4. 生物处理 较为常见的生物处理有微生物发酵法和酶解法。某些微生物(如乳酸菌、枯草芽孢杆菌等)产生的特异性酶对大豆中的胰蛋白酶抑制剂有一定的灭活效果,通过微生物发酵可以降低大豆中胰蛋白酶抑制剂活性。胰蛋白酶抑制剂本身是一种蛋白质,因此也可以通过蛋白酶酶解使其失活。酶解法相对于其他处理方法来说成本较低,且酶是一种天然产物,安全性高,不会对人体或动物健康造成不良影响,使用酶进行处理可以确保产品的安全性和可靠性。