4-碘咪唑在于许多天然化合物中，如酶、核酸和生物碱等，在生物过程中起着重要作用。
首先，以咪唑和碘为原料在碱性体系中反应完全得到反应产物4，5-二碘咪唑，此处碱性体系可以是氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾中的一种或两种的溶液，溶剂可以是甲苯、苯、四氯化碳、二甲苯、乙醚、四氢呋喃等中的一种或两种或两种以上任意比例的混合物。反应用TLC跟踪检测反应，反应完全后，反应液用浓盐酸或浓硫酸中和，过滤，烘干得到中间体4，5-二碘咪唑。
进一步，4，5-二碘咪唑经过脱碘反应得到目标产物4-碘咪唑。这一步骤的特征是采用的还原剂为亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、保险粉等中的一种或任意配比的几种，所用的溶剂可以是水、甲醇、乙醇、DMF、甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃等中的一种或两种或两种以上任意比例的混合物。应用TLC跟踪检测反应，反应完全后，经常规后处理得到目标产物4-碘咪唑。