鸡细胞凋亡抑制因子ELISA试剂盒性质、用途与生产工艺
鸡细胞凋亡抑制因子ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡细胞凋亡抑制因子(IAP)水平。
用纯化的鸡细胞凋亡抑制因子(IAP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入细胞凋亡抑制因子(IAP),再与HRP标记的细胞凋亡抑制因子(IAP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞凋亡抑制因子(IAP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡细胞凋亡抑制因子(IAP)浓度。
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240pg/ml5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
120pg/ml4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液
60pg/ml3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液
30pg/ml2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液
15pg/ml1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
鸡细胞凋亡抑制因子ELISA试剂盒
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