线粒体提取试剂盒

线粒体提取试剂盒性质、用途与生产工艺

用途

线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

线粒体提取原理图

原理：细胞/组织通过Buffer A致敏，然后细胞以Z字形路径通过离心管柱，在这个过程中细胞膜会破裂。进而通过差速离心和密度离心分离出完整的线粒体，整个过程无需匀浆和超高速离心。

操作步骤

1.样本处理a.组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次；b.培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800g离心5~10 min收集细胞，计数。每次提取需要5×107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次。

2.将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g离心5 min。

3.取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g再次离心5 min。

4.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000 g离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。

5.往线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000 g离心5 min。

6.取上清，转移至新的离心管中，4℃，12,000 g离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。

7.用50-100μL Store Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

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