RNA PULLDOWN试剂盒

RNA PULLDOWN试剂盒性质、用途与生产工艺

简介

蛋白质与RNA的相互作用是许多细胞功能的核心，如蛋白质合成、mRNA组装、病毒复制、细胞发育调控等，了解它们之间相互作用的分子机制对理解这些生物学过程非常重要。RNA pulldown技术利用脱硫生物素末端标记的RNA和链霉亲和素标记的磁珠高效富集及鉴定RNA结合蛋白质（RBPs）。 

背景

RNA pulldown技术利用脱末端标记的RNA高效富集及鉴定RNA结合蛋白(RBPs)。此方法避免了抗体的使用，大大延伸了使用范围。随着RNA pulldown技术的不断完善，其在生命科学研究及医学领域中扮演的角色愈加重要。RNA pull-down实验就是先将RNA进行标记（如生物素探针标记），再与细胞裂解液共同孵育，从而形成RNA-蛋白质复合物，之后再分离复合物得到蛋白质，通过western blot 或mass Spectrometry检测蛋白质的技术。

技术原理

体外转录合成生物素标记的目标lncRNA（包括环状RNA）（包含用作正负对照的RNA片段）， 与细胞抽提物孵育；用亲和素锚定磁珠收集RNA-蛋白质或RNA-RNA复合物，充分洗涤后洗脱复合 物。若检测与lncRNA（包括环状RNA）相互作用的蛋白质靶分子，则对RNA-pull down产物进行 蛋白质电泳分离，银染检测目标蛋白，并切胶进行质谱分析；也可对pull-down产物直接进行 western blot验证；若检测与lncRNA（包括环状RNA）相互作用的RNA靶分子，则对RNA-pull down产物进行RNA抽提，并进行特异性的qRT-PCR检测。

使用方法

针对目标区域设计脱硫生物素标记的特异性RNA探针，并与细胞蛋白提取物孵育。通过偶联磁珠，经洗脱，得到目的RNA探针-蛋白质复合物。最后采用Western Blot或质谱鉴定蛋白质类型。

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