大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)ELISA试剂盒

大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)ELISA试剂盒性质、用途与生产工艺

简介

大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)水平。用纯化的大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)，再与HRP标记的大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠甲硫氨酸亚砜还原酶B1(MSRB1)浓度。

检测原理

结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

应用

用于巨噬细胞MsrA对动脉粥样硬化的干预研究
甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)能特异性地还原Met氧化产物——甲硫氨酸亚砜(MetSO),是一类进化保守、普遍存在的细胞内抗氧化酶。
方法：构建含hMsrA的pWPI重组慢病毒载体,以含绿色荧光蛋白GFP的空载体为对照,分别与包装质粒A8.91和包膜质粒pD2G共转染293t细胞系,包装病毒颗粒,高速离心浓缩后检测病毒滴度。体外实验：将慢病毒颗粒以适宜的MOI(Multiplicity of infection)感染小鼠原代腹腔巨噬细胞和传代RAW264.7巨噬细胞系,观察高表达hMsrA对oxLDL刺激下巨噬细胞生物学功能的影响。
采用油红O染色评价细胞泡沫化状态：荧光探针DCF检测细胞ROS水平；ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-6的分泌；RT-PCR和Western Blotting方法检测脂质转运相关蛋白ABCA1、ABCG1、SRBI和LXR的转录和表达水平。

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