微丝染色液(R250法)

微丝染色液(R250法)性质、用途与生产工艺

概述

一般认为，在非肌肉细胞中，微丝可推动细胞质流动，参与细胞的变形运动，胞吞作用与胞饮作用等。分布在微绒毛中的微丝还可引起微绒毛伸缩和摆动。在肌肉细胞中则参与构成细肌丝，与主要由肌球蛋白组成的粗肌丝一起实现肌肉细胞的收缩功能。
微丝染色液(R250法)在染色过程中由于微观结构不稳定，有些纤维在光学显微镜下无法辨认，因此能够看到的纤维主要是由微丝组成的应力纤维。微丝染色液(R250法)主要显示由微丝构成的应力纤维，由于细胞对细胞基质的附着和维持扁平铺展的形状，该纤维在体外培养的贴壁细胞中尤其发达。

操作步骤

1、取材：用去离子水稀释PBSbuffer(*10)至1*。轻轻撕取约1厘米洋葱鳞茎内皮，孵育，使其下沉。
2、抽提：弃PBSbuffer，加入TMbuffer，盖上称量瓶盖子37℃处理。
3、漂洗：弃TMbuffer，用去离子水稀释Mbuffer(3×)至1×，用1×Mbuffer清洗。
4、固定：稍微晾干，加入Microfilamentfluid固定细胞。
5、冲洗：弃Microfilamentfluid，用1×Mbuffer清洗。
6、染色：弃PBSbuffer，把盖玻片立于吸水滤纸上吸去边缘水分，加入R250stainingsolution染色。
7、去离子水冲洗染液，标本铺在载玻片上，加盖玻片，镜检。

注意事项

动物细胞微丝微丝染色液(R250法)染色时，向称量瓶中加入试剂应缓慢，避免直接滴到玻片或样本上；清洗细胞动作应轻柔，避免细胞脱落。

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