DNA磷酸化试剂盒
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- CAS号:
- 英文名:
- DNA Phosphorylating Kit
- 英文别名:
- DNA Phosphorylating Kit
- 中文名:
- DNA磷酸化试剂盒
- 中文别名:
- DNA磷酸化试剂盒
- CBNumber:
- CB45520468
- 分子式:
- 分子量:
- 0
- MOL File:
- Mol file
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DNA磷酸化试剂盒性质、用途与生产工艺
DNA磷酸化试剂盒能将DNA分子5′端的-OH基团磷酸化,处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等,不需要纯化。
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团),而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5′端的-OH基团和另一个DNA分子3′端的-OH基团进行连接,因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA之间的连接效率一般都比天然DNA彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接,人工合成的DNA跟天然DNA有2个端口可以连接,人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接),尤其是在平末端连接时。DNA磷酸化试剂盒可以快速把DNA 5′端的-OH基团变成-PO4基团,使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
![DNA磷酸化试剂盒](/NewsImg/2021-10-27/6377092998375677541665355.png)
注意:如果是PCR产物,一定要先胶回收,不能使用没经过纯化的PCR反应液,因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶,降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL):
成分用量
PCR胶回收片段2μL(不超过10 pmol)
10×TPK缓冲液2μL
ATP溶液(10 mM)5μL
T4多核苷酸激酶(10U/uL)1μL
超纯水到20μL
2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟,灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。
DNA磷酸化试剂盒
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