GRNA文库构建

GRNA文库构建性质、用途与生产工艺

概述

gRNA文库的建立将为重要基因功能的筛选、疾病机制研究及药物研发等方面提供新的动力，大大加快人类功能基因组研究计划的进展。

gRNA 文库质控示例

小于12000个gRNA的文库，10 fold覆盖度 >75%，gRNA覆盖度 >95%；
大于12000个gRNA的文库，10 fold覆盖度 >70%，gRNA覆盖度 >90%。

基本原理

gRNA文库构建基本原理是通过一段与靶标DNA相同的gRNA指导Cas9核酸酶对靶向基因进行DNA修饰，以此造成基因的功能突变或缺失。在此基础上，利用CRISPR/Cas9技术建立哺乳动物全基因组突变库或者与某类功能相关的基因突变体库，通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，发掘与筛选表型相关的基因，称为CRISPR/Cas9 gRNA文库筛选。

组成

gRNA文库包括：全基因组文库、lncRNA文库、信号通路、细胞凋亡、细胞增殖、离子通道、核受体相关、各种疾病相关等文库。全基因组gRNA文库的构建可以针对任何类型的基因组DNA，包括ORF cDNA，lncRNA cDNA以及特定区域的cDNA片段等。能够针对全长cDNA乃至基因组DNA构建高效的gRNA文库，适用于高通量功能基因及相关药物靶点筛选。

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