磷酸钙细胞转染试剂盒

磷酸钙细胞转染试剂盒性质、用途与生产工艺

应用

磷酸钙细胞转染试剂盒在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性。用磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。
HEK293或HEK293T细胞，即通常所谓的293细胞，是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达90%以上；通常很容易达到40-50%左右的转染效率。
大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合磷酸钙法转染，但效率比293细胞要略低一些。磷酸钙细胞转染试剂盒不仅适合于大多数贴壁细胞的转染，也适用于一些悬浮细胞的转染。磷酸钙细胞转染试剂盒提供的试剂都经无菌处理，可以直接使用。

操作步骤

1传代细胞准备细胞在转染前24h传代,待细胞密度达50%～60%满底时即可进行转染。加入沉淀前3～4h，用9ml完全培养液培养细胞。
2　DNA沉淀液的准备首先将质粒DNA用乙醇沉淀（10～50μg/10cm平板），空气中晾干沉淀，将DNA沉淀重悬于μL无菌水中，加50μL2.5mol/L CaCl2。
3用巴斯德吸管在500μL　2×HeBS中逐滴加入DNA-CaCl2溶液，同时用另一吸管吹打溶液，直至DNA-CaCl2溶液滴完，整个过程需缓慢进行，至少需持续1～2min。
4室温静置30min,出现细小颗粒沉淀。
5将沉淀逐滴均匀加入10cm平板中，轻轻晃动。
6在标准生长条件下培养细胞4～16h。除去培养液，用5ml　1×HeBS洗细胞2次，加入10ml完全培养液培养细胞。收集细胞或分入培养皿中选择培养。

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