过氧化物酶染色液(联苯胺法)

过氧化物酶染色液(联苯胺法)性质、用途与生产工艺

概述

过氧化物酶(POX)是临床上辅助判断急性白血病细胞类型首选、最重要的细胞化学染色，虽然推荐使用3-氨基-9乙基咔唑法，但现最常用的仍是四甲基联苯胺法-过氧化物酶染色液(联苯胺法)。过氧化物酶(POX)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

染色原理

过氧化物酶染色液(联苯胺法)是ICSH推荐采用的POX染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的3，3-二氨基联苯胺(DAB)的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX所在部位。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色，POX活性部位呈棕黄色。

操作步骤

1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA固定液，4℃固定30～60s，稍水洗。
2、滴加配制好的POX孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min，水洗2min。
3、滴加WG染色液，孵育30～60s。
4、直接滴加等量WGbuffer，染色10～15min。
5、水洗、晾干、镜检。

注意事项

1、血液或骨髓涂片应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。
2、POX孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
3、样本在未染色前切勿接触氧化剂类物质，以免细胞内的过氧化物酶被抑制。
4、每次染色时，应采取健康人末梢血或骨髓涂片作为阴性对照。

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