TDT末端转移酶

TDT末端转移酶性质、用途与生产工艺

背景

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase（末端脱氧核苷酸转移酶，TdT）是一种模板非依赖型DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸重复添加到寡核苷酸、单链和双链DNA的3'羟基端。TdT反应需要含有至少3个碱基的短序列作为引物。以RNA为模板时，TdT性能严格依赖于受体RNA 3’-末端的三级结构和核苷酸的种类。一般TdT对RNA模板的作用效率比DNA模板低。

应用

寡核苷酸或DNA 3’羟基末端标记
DNA末端加尾(DNA tailing)
5’-RACE
合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链

来源

大肠杆菌细胞，含有编码牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶的基因。

概述

末端转移酶（TdT）是一种不依赖于模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3’羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子均可作为TdT的底物，加尾长度可达5~300nt。该末端转移酶（TdT）分子量为58.3 kDa，无5’和3’核酸外切酶活性，反应中加入Co2+可提高加尾效率。该酶广泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修饰碱基（如ddNTP，DIGdUTP）标记DNA 3’末端、TdT介导的dUTP 缺口末端标记技术（细胞凋亡的原位检测）等试验。该酶经检测无DNA内切酶和外切酶污染，不含RNase。

活性定义

37℃60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3’羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位
1×TdT Buffer
100mM KCl, 30mM Tris-acera, 0.05% (v/v) Triton X-100 (pH 7.5 at 25 °C)

储存

-20℃可保存3年。

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