GST PULLDOWN试剂盒

GST PULLDOWN试剂盒性质、用途与生产工艺

背景

GST pulldown试剂盒是利用重组技术将探针蛋白与GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH（Glutathione）亲和结合。因此，当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。

组成

GST-pulldown主要包括以下三个部分：①利用基因重组技术构建带有GST标签的原核表达载体；②通过原核表达系统表达带有GST标签的融合蛋白；③利用GST亲和纯化柱进行蛋白纯化获得高纯度的融合蛋白，再利用GST亲和纯化柱进行蛋白间的相互作用检测。

用途

用于验证两个已知蛋白的相互作用，或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。

作用原理

GST pulldown实验是一个有效验证酵母双杂交系统的体外试验技术。将靶蛋白质-GST融合蛋白质亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白质亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白质”，目的蛋白质溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白质(目的蛋白质)”，洗脱结合物通过SDS-PAGE电泳分离，最后经Western Blot，从而证实两种蛋白质间的相互作用；“诱饵蛋白质”和“捕获蛋白质”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白质、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。

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