背景[1-3]
叶酸测定培养基用于样品中叶酸测定，是利用干酪乳杆菌ATCC7469对样品中的叶酸含量进行微生物法测定。方法的测试菌株为干酪乳杆菌ATCC7469。叶酸培养基含有干酪乳杆菌生长所必需的除叶酸外所有营养成分。而叶酸是干酪乳杆菌ATCC7469生长所必需的B族维生素。
配方(g/L)：酸水解酪蛋白：10.0；葡萄糖：40.0；乙酸钠：40.0；磷酸二氢钾：1.0；磷酸氢二钾：1.0；DL-色氨酸 ：0.2；L-胱氨酸盐酸盐：0.5；腺嘌呤 ：0.01；鸟嘌呤盐酸盐：0.01；尿嘧啶：0.01；黄嘌呤：0.02；吐温80：0.1；还原型谷胱甘肽：0.005；无水硫酸镁：0.2；氯化钠：0.02；硫酸亚铁：0.02；硫酸锰：0.015；核黄素：0.001；对氨基苯甲酸：0.002；盐酸吡哆醇：0.004；盐酸硫胺素：0.0004；泛酸钙：0.0008；生物素：0.00002；pH6.7±0.125℃。
叶酸测定培养基
用法：
1.用100ml去离子水重悬9.4g本产品，加入50mg抗坏血酸。
2.混合均匀，分装时使沉淀均匀分布。每个测定试管中分装5ml。
3.加入标准样或待测样。用去离子水定容至10ml。
4.121°C灭菌5min。立即冷却。
应用[4][5]
用于微孔板法测定乳粉中叶酸的含量研究
叶酸其实是B族维生素中的一种,它是人体健康中必不可少的部分,所以叶酸的每日叶酸摄取量和叶酸的测定方法及其毒理学作用的研究都是现如今研究的热门话题,而且叶酸的测定方法是研究这些问题的基础和前提,所以叶酸的检测方法则变得特别重要。如何准确测出叶酸的含量就是衡量检测方法好坏的重要标准之一。
微生物法是测定叶酸的常用方法,可以准确的检测出具有生化活性的叶酸,结果表示出的是基体中的叶酸含量,这也是微生物测定法不同于其他的检测方法的的优点,是仪器测定方法难以达到的。现在大部分国际标准的测定方法都将微生物检测法当做多种维生素检验的标准。
在我国现在实行的国家检测标准里也仍然用微生物方法检测乳制品和婴幼儿配方食品中的叶酸。酪乳酸杆菌（ATCC 7469）相对叶酸有极强的特异性,叶酸作为该菌必需的生长因子,而且在一定的生长环境下,该菌生长和增殖的速率与体系中叶酸的含量具有一定的比例关系,微生物法则是依据这个原理对叶酸定量分析的。
微生物法的检测过程一般会分为以下六个检测步骤:1)工作菌悬液的制备;2)检测样品和工作标准曲线的制备;3)测试培养基的制备,现在可以应用成品培养基;4)灭菌及接种和培养;5)样品测定,主要方法是光密度法;6)计算。本文基于对微生物方法的原理和基本的分析步骤制定了微孔板的测定方法,通过对十组的未知浓度的样品重复五次测定,得到样品的相对标准偏差均<2%;通过的已知浓度样品的测定,得出实验的相对误差<2%;实验的回收率范围为98%-106%;线性的相关系数也可以达到0.9995以上;
同次实验的平行孔间的变异系数也都<5%。所以,微孔板法可以用来准确的测定乳粉中叶酸的含量,并且相比较传统的试管方法,可以大量的缩短实验的操作时间,降低实验的难度,同时节约了实验成本。
微孔板法的优势在于成本少、灵敏度高、适用于数量大的样品测定、可操作性强;随着当代的科技迅速发展,很多的仪器检测方法都被开发出来,用以检测低含量的叶酸食品。
参考文献
[1]Tissue-specific distribution of aberrant DNA methylation associated with maternal low-folate status in human neural tube defects[J].Huibo Chang,Ting Zhang,Zhiping Zhang,Rui Bao,Chengbo Fu,Zhigang Wang,Yihua Bao,Yuanyuan Li,Lihua Wu,Xiaoying Zheng,Jianxin Wu.The Journal of Nutritional Biochemistry.2011(12)
[2]Association of maternal polymorphisms in folate metabolizing genes with chromosome damage and risk of Down syndrome offspring[J].Fabio Coppedè,Francesca Migheli,Stefania Bargagna,Gabriele Siciliano,Ivana Antonucci,Liborio Stuppia,Giandomenico Palka,Lucia Migliore.Neuroscience Letters.2008(1)
[3]Determination of folic acid by ion-pair RP-HPLC in vitamin-fortified fruit juices after solid-phase extraction[J].Dietmar E Breithaupt.Food Chemistry.2001(4)
[4]Standardisation of HPLC techniques for the determination of naturally-occurring folates in food[J].Food Chemistry.1998(2)
[5]范松阳.微孔板法测定乳粉中叶酸的含量[D].东北农业大学,2018.