背景[1-7]
Cy3标记山羊抗小鼠IgG(H+L)用纯化的小鼠IgG免疫山羊，然后用亲和纯化柱对获得的抗血清进行纯化，并经过人IgG吸附纯化的优质二抗。对人IgG几乎没有结合能力。Cy3标记山羊抗小鼠IgG(H+L)与小鼠IgG分子和IgM分子有特异性反应，与其它小鼠免疫球蛋白（包括IgE、IgD、IgA等）的轻链有交叉反应。该二抗与血清内非免疫球蛋白无交叉反应。
通过血清吸附处理，其与人、牛、马血清内蛋白（包括免疫球蛋白）的交叉反应降到最低，但可能与除此以外其它种属的免疫球蛋白有交叉反应。Cy3是一种红色荧光探针。它比绝大部分其它的红色荧光探针更加明亮，更加不容易淬灭，而且背景更低。Cy3激发光波长为570nm，发射光波长为650nm，呈绿色荧光。但是在绿光光谱波长激发下，Cy3也可出现红色荧光。
Cy3属于花菁类染料（Cyanine Dyes），常见的Cy系列染料主要包括有Cy2、Cy3、Cy5等，能与细胞内蛋白质结合。这类染料的荧光特性与传统荧光素类似，但水溶性和对光稳定性较强，荧光量子产率较高，对pH等环境不敏感。常用于多重染色。Cy3在氩光灯（514nm或528nm）下可以被激发出50%的光强，在氦氖灯（543nm）或者汞灯（546nm）下则约75%的光强。
Cy3可以和荧光素一起作双标。Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。因为激发光和发射光波长很接近TRITC，在荧光显微镜中，可使用和TRITC一样的滤波片。山羊抗小鼠免疫球蛋白抗体是为了能和所有小鼠免疫球蛋白重链和轻链起反应的同类纯化抗体准备的。
为了把交叉反应的影响降到*,相比于其他抗体,山羊抗小鼠免疫球蛋白抗体应优先选择从小鼠免疫球蛋白和血清中提取。标记每个聚合物的标准是每一个免疫球蛋白分子用2-8个荧光团或生物素分子标记。在准备阶段,必须检测样品中有没有非结合的染料,并且把样品在无荧光实验中做检测以确保较低的非特异性染色的可能。
应用[8][9]
Cy3标记山羊抗小鼠IgG(H+L)可用于细胞或组织内的微管(microtubule)的荧光检测。可以用于荧光显微镜观察，也可用于流式细胞仪检测。
口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄动物易得的一种烈性疾病,对养殖业造成了巨大的经济损失。随着生物技术的发展,FMD疫苗的研制也从传统疫苗转向新型疫苗,其中表位疫苗因其呈现出诸多优势而成为疫苗研究的热点,如能被多种遗传背景的MHC分子识别并结合,使抗原得到高效的递呈,因此在有效的应对病原微生物的变异以及免疫反应中的诸多不利因素等免疫方面具有独特的优势。
嵌入型蛋白SLP-Multi VP1与重组蛋白SLP免疫6周龄的昆明小鼠,以PBS作为阴性对照组。小鼠经三次免疫后,摘取其脾脏组织分离总淋巴细胞,按既定方法处理并通过流式细胞仪分析各免疫组小鼠CD4+T和CD8+T细胞的变化,试验结果显示:嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫组的CD4+T与CD8+T数量高于SLP免疫组及PBS对照组,差异显著(P<0.05)。
该结果提示嵌入型蛋白SLP-Multi VP1可诱导机体产生免疫反应。将嵌入型蛋白SLP-Multi VP1与重组蛋白SLP免疫6周龄的BALB/c小鼠和昆明小鼠,用间接ELISA方法检测了三次免疫后各组小鼠的总Ig G水平,试验结果显示,2种小鼠均能产生较高滴度的Ig G(P<0.05),该结果表明嵌入型蛋白SLP-Multi VP1具有良好的抗原性,并且2种小鼠的Ig G水平差异不显著(P>0.05),表明不同种小鼠间无差异性。
经第三次免疫后,采集BALB/c和昆明小鼠的血清,采用Ig G亚型ELISA试剂盒(e Bioscience公司)进行检测Ig G1和Ig G2a水平,获得的实验数据通过SPSS统计学分析,试验结果显示:在两种免疫动物小鼠模型中,嵌入型蛋白SLP-Multi VP1组Ig G1和Ig G2a水平均高于SLP免疫组,差异显著(P<0.05)。另外,在嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫组中,Ig G2a的水平高于Ig G1,差异显著(P<0.05)。而在SLP免疫组中,Ig G1和Ig G2a水平差异不显著(P>0.05),该结果提示嵌入型蛋白SLP-Multi VP1可能倾向于激发Th1类免疫应答。
参考文献
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[2]Thomsen-Friedenreich(TF)antigen as a target for prostate cancer vaccine:clinical trial results with TF cluster(c)-KLH plus QS21 conjugate vaccine in patients with biochemically relapsed prostate cancer[J].Susan F.Slovin,Govind Ragupathi,Cristina Musselli,Celina Fernandez,Meghan Diani,David Verbel,Samuel Danishefsky,Philip Livingston,Howard I.Scher.Cancer Immunology,Immunotherapy.2005(7)
[3]Comparison of immune responses against foot-and-mouth disease virus induced by fusion proteins using the swine IgG heavy chain constant region orβ-galactosidase as a carrier of immunogenic epitopes[J].Guangjin Li,Weizao Chen,Weiyao Yan,Kai Zhao,Mingqiu Liu,Jun Zhang,Liang Fei,Quanxing Xu,Zutian Sheng,Yonggan Lu,Zhaoxin Zheng.Virology.2004(2)
[4]Immunogenicity of polymerizable synthetic peptides derived from a vaccine candidate against schistosomiasis:the asparaginyl endopeptidase(Sm32)[J].N Chacón,S Losada,H Bermúdez,I.M Cesari,J Hoebeke,Oscar Noya.Immunology Letters.2003(3)
[5]A mimotope peptide‐based vaccine against Schistosoma mansoni:synthesis and characterization[J].R.Arnon,R.Tarrab‐Hazdai,M.Steward.Immunology.2002(4)
[6]Diagnosis and screening of foot-and-mouth disease[J].Comparative Immunology,Microbiology and Infectious Diseases.2002(5)
[7]FMD vaccines[J].T.R Doel.Virus Research.2002(1)
[8]IMMUNOGENICITY AND SPECIFICITY OF THE CANDIDATE MULTI-EPITOPE-VACCINES AGAINST HIV-1[J].Yun Lu,Jian Ding,Ying-Hua Chen.Immunopharmacology and Immunotoxicology.2001(4)
[9]赵慧.FMDV各型表位嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的表位预测及不同种小鼠IgG亚型变化的影响[D].内蒙古农业大学,2015.