活细胞核染色试剂盒
活细胞核染色试剂盒 性质
活细胞核染色试剂盒是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测试剂盒。CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
CCK法是经典的周期检测方法。CCK为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。CCK染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。
在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5%CO2的条件下)。向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。
将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6,12,24或48小时)。
向每孔加入10μl CCK8溶液(engreen)(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
将培养板在培养箱内孵育1-4小时。用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。