LLC-PK1 Cells(赠送Str鉴定报告)|猪肾细胞

"LLC-PK1 Cells(赠送Str鉴定报告)|猪肾细胞

细胞背景资料：肾；自发永生；Hampshire

细胞形态：上皮细胞样

【细胞培养中原虫的污染情况总结】原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不HAO，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站YOU势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，Zui终形成恶性循环。污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中(不加细胞)，３７度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗(酸链霉素和苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。１)孵箱应定期用三氧机消毒或者紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水；２)超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素；３)超净台的风机不能过大，风机到６-８格。否则也可能能致霉菌污染；４)无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的喷洒中和，约几小时即可进入操作。

细胞生长：贴壁

H-929细胞类似产品：：C3H/10T1/2 CL8细胞、ZR751细胞、NCI-H661细胞

TMK-1细胞类似产品：：MGHU3细胞、SF 295细胞、BOWES细胞

HEK-AD293细胞类似产品：：KASUMI1细胞、ROS1728细胞、LA-N-5细胞

NCI-H2405细胞类似产品：：MDA-MB-134VI细胞、OV3121细胞、MHHCALL2细胞

NOK细胞类似产品：：Biologics Standards-Cercopithecus-1细胞、RPMI 1846细胞、DoHH2细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞培养更HAO经验详解：1)收到细胞，首先要镜检：观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很HAO，观察细胞密度，有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化，很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样，主要是贴壁牢固问题。比如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶子里面，会发生大片的脱落，细胞聚集在一起，但是细胞生长还是正常的，通过离心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的贴壁生长。2)当通过上一步的观察，细胞初步没有问题时，进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中大部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生长期，恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生长期的状态，在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率，和细胞的存活率。3)如果经步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很HAO时，则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶；对于生长较慢，细胞比较薄，状态容易波动的细胞类型，一次少传些，每瓶细胞密度大些，便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞，次处理也可以依照第二种情况。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

PANC-08-13细胞类似产品：：SUM102细胞、JROECL21细胞、KYSE 150 KYSE150 Kyse150 KY150

细胞

UM-UC-14细胞类似产品：：CF-1 MEF细胞、GL261细胞、ZYM-DIEC02细胞

RSC-96细胞类似产品：：SKRC-52细胞、769-P细胞、SUM 52PE细胞

TR 146细胞类似产品：：SW1222细胞、SNB19细胞、KM H-2细胞

SGC996细胞类似产品：：HEI-193细胞、HDF-a细胞、SNU-407细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

PANC 813细胞类似产品：：HCT GEO细胞、MESSADX5细胞、PM6细胞

NBL-1细胞类似产品：：LC-1 sq细胞、Highly Aggressively Proliferating Immortalized细胞、KU19-19细胞

Hs729T细胞类似产品：：NIHOVCAR3细胞、EJ细胞、MDA361细胞

NK 10a细胞类似产品：：NCIH1734细胞、alpha TC1.6细胞、MPP-89细胞

ZYM-SVEC01细胞类似产品：：EB-1细胞、HOS-143B细胞、KTCTL-140细胞

H2196细胞类似产品：：LA-N-6(OAN)细胞、MC/CAR细胞、IGR-OV1细胞

细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装HAO细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

贴壁消化难题：１，先用PBS 把细胞洗两遍，使瓶内没有血清了，减少对胰酶的中和，然后用新配的０.２５%的胰酶加入３ml左右，放在３７度，然后可以在细胞有些消化下来时，拿着瓶口，运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体，这样细胞很快就下来了，还不需要吹打，分散也均匀；２，成团、絮状：消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象，血清可以终止胰酶的作用，如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉，也可以不倒，直接加血清终止，如果消化液中加入了edta的话，就要将消化液倒干净，如果细胞贴壁要求不是很严格的话，一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强，用０.５%胰酶(含０.１%EDTA)一般要消化１２~１５min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性Zui强)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势)，随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验，则不能弃去胰酶)，加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代，否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片)；消化过度：马上用培养基中和，用吸管吹打细胞，收集全部的细胞到以无菌的离心管中８００RPM ３分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培养，状态不HAO的细胞在培养的过程中会死亡脱落，在换液的时候可以清除掉！

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MHCC97细胞类似产品：：SK N SH细胞、BPH1细胞、LN299细胞

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H1417细胞类似产品：：Jiyoye细胞、GM03671C细胞、GM2131细胞

McArdle RH-7777细胞类似产品：：WB F344细胞、786.O细胞、OVCAR-420细胞

IMR 32细胞类似产品：：RenCa细胞、MDA-MB-134 VI细胞、H1048细胞

BT-20细胞类似产品：：Ramos (RA 1)细胞、H-1694细胞、MC-4细胞

3T3细胞类似产品：：Me-Wo细胞、WERIRb1细胞、Line 207细胞

NOZ细胞类似产品：：H196细胞、NCI-H-69细胞、THP-1细胞

Z-138细胞类似产品：：H838细胞、LNCaP-FGC细胞、D283 Med细胞

MCF-7/ADR-RES细胞类似产品：：PT67细胞、B16-F0细胞、MDAMB-231细胞

U031细胞类似产品：：HEL299细胞、NCIH1385细胞、CCF-STTG1细胞

LUDLU-1细胞类似产品：：HOP62细胞、SY5Y细胞、NCIH1734细胞

MCF-7B细胞类似产品：：Jurkat E6.1细胞、NCI522细胞、HEB细胞

N1E115细胞类似产品：：ST-2细胞、SW 780细胞、NCI-H226细胞

WEHI 164 TC细胞类似产品：：Hs683T细胞、A.704细胞、Colon38细胞

CCD1112Sk细胞类似产品：：1E8-H细胞、NCI-H292细胞、WM-115细胞

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