EFM-192A Cells(赠送Str鉴定报告)|人乳腺癌细胞

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细胞背景资料：乳腺癌；胸腔积液转移；女性

细胞形态：上皮细胞样

解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：１)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够GAO，考虑到这一损失。起始浓度为１*１０(６)至１*１０(７)细胞/毫升；２)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷冻的培养物，保存时间为１-５天，但这不是保存的方法。在３７℃充分解冻后应立即开始培养；３)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在２４小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期；４)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。

细胞生长：贴壁

B16/F0细胞类似产品：：P3/ag细胞、SW-839细胞、ATN1细胞

THC-8307细胞类似产品：：LS 123细胞、SW-403细胞、Medical Research Council cell strain-9细胞

C4-2 B细胞类似产品：：AR41P细胞、EB-3细胞、Panc-813细胞

SKUT1细胞类似产品：：Tn5 B1-4细胞、Calf Pulmonary Artery Endothelial细胞、HepG2细胞

Pa17C细胞类似产品：：H-345细胞、2B4-L细胞、HT 1197.T细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，ZuiHAO经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

U 266细胞类似产品：：SUDHL-4细胞、AML-EOL-1细胞、HCS-2/8细胞

BEAS2B细胞类似产品：：JOSK-M细胞、MCA 38细胞、WM-239-A细胞

Melanoma 14细胞类似产品：：T. T细胞、NSC-34细胞、OVCAR5细胞

Kit-225-K6细胞类似产品：：OVCA-420细胞、H4IIEC3细胞、ABE­8.1/2细胞

HCET细胞类似产品：：NCI H295R细胞、FM88细胞、EA.hy 926细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

SNUC2B细胞类似产品：：PaTu 8988 S细胞、H-727细胞、C-28/I2细胞

CCD19-Lu细胞类似产品：：UCD-MLA-144细胞、NG 108-15细胞、AAV-293细胞

LSC-1细胞类似产品：：NCIH1703细胞、NIH 3T3细胞、CF-1 MEF细胞

SH-SY5Y细胞类似产品：：HMEC1细胞、COR L279细胞、ES-2细胞

FAT细胞类似产品：：Dunn LM8细胞、IPLB-SF 21AE细胞、H1650_CO细胞

TK-10细胞类似产品：：Panc 03.27细胞、FLC-7细胞、Hep2细胞

细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装HAO细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

贴壁细胞消化传代时通常采用两种方法：一、加入胰酶等细胞脱落后，再加培养基中止胰酶作用，离心传代；二、加入胰酶后，镜下观察待细胞始脱落时，弃胰酶，加培养液分瓶。但前者太麻烦，而后者有可能对细胞施加胰酶选择，因为总是贴壁不牢的细胞先脱落，对肿瘤细胞来说，这部分细胞有可能是恶性程度较GAO的细胞亚群。一种简单的消化传代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(３０s)，弃之，再加入适量胰酶作用１０s-４０s(根据细胞消化的难易程度)，弃之，这样依赖残余的胰酶就可将细胞消化单细胞。对于较难消化的细胞，可以用２%利多卡因消化５-８分钟，然后再弃去，加培养基吹打也可以，对细胞的影响不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把旧培养液吸的干净一点，直接加酶消化应该不会有什么问题。弃培养液后，用０.０４%的EDTA冲洗一次，再用１/４v的０.０４%的EDTA室温孵育５min，弃取大部分EDTA，加入与剩余EDTA等量的胰酶(预热)总体积１/１０v。消化到有细胞脱落。不过有人说EDTA对细胞不HAO，有证据吗？培养的BASMC：倒掉旧培养液加入少量胰酶冲一下，倒掉再加入０.１２５-０.２５%胰酶约６-１０滴或１ml(２５ml bottle)消化再加入适量新培养基中和，并分瓶这种方法简单、省事；效果很HAO并且不损失细胞！

SKNBE细胞类似产品：：PZ-HPV-7细胞、L-132细胞、H-446细胞

CAL-51细胞类似产品：：WEHI 164细胞、HMVEC细胞、MC3T3细胞

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SK-MEL-24细胞类似产品：：HL 60细胞、EM-3细胞、NuTu 19细胞

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HRA-19细胞类似产品：：NCI-H441细胞、aTC1-6细胞、HL 60细胞

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3T3(A31)细胞类似产品：：MKN-1细胞、H-548细胞、PL-11细胞

COLO 738细胞类似产品：：T 98 G细胞、Hs 688(A).T细胞、P560细胞

Psi2 DAP细胞类似产品：：NCIH128细胞、A9(Hamprecht)细胞、ML2细胞

Li-7细胞类似产品：：NCTC clone 929细胞、Balb/3T3-4-Cl31细胞、VM-CUB-I细胞

SJSA1细胞类似产品：：L2细胞、CL34细胞、SHG44细胞

SKNEP-1细胞类似产品：：HuLEC-5a细胞、KM-12细胞、786-O细胞

U373细胞类似产品：：ASPC1细胞、BIC1细胞、Y-79细胞

H460细胞类似产品：：Karpas 299细胞、87MG细胞、MA 104细胞

SNU1细胞类似产品：：K-1735细胞、SNU449细胞、MM-1S细胞

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