Anip-973 Cells(赠送Str鉴定报告)|人肺腺癌细胞

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细胞背景资料：肺腺癌

细胞形态：上皮细胞样

体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良HAO(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，Zui后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。

细胞生长：贴壁

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P3X63Ag8-6-5-3细胞类似产品：：SUM102PT细胞、RINm5F细胞、RT112细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞培养过程中，总是会出现各种意想不到的问题，一不留神就会全盘皆输。所谓细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。下面是贴壁细胞的保藏方法，希望对细胞培养初学操作者有所帮助：1)观察细胞状态：贴壁细胞密度达到85-90%，即可以细胞冻存形式进行保藏，拍照，记录细胞状态；2)细胞清洗：培养皿表面消毒后，转移至生物安全柜中，去除培养皿中培养液，加入12mlPBS，轻轻摇晃培养皿清洗细胞，随后吸除PBS清洗液；3)细胞消化：将2ml胰酶加入培养皿中，完全覆盖细胞，置于显微镜下观察（期间禁止摇晃培养皿），当细胞刚开始脱落时，立即转移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余约0.5ml胰酶，转移至培养箱内继续消化，每30秒肉眼观察细胞状态，至细胞成流沙状完全脱落，转移至生物安全柜中，加入12ml完全培养基，终止消化；4)细胞离心：将终止消化后的细胞悬液吹打均匀，吸取至15ml离心管中，1000r/min（110g），离心3min；5)细胞冻存：离心后去除细胞上清液，按照冻存细胞量5*10^5/ml，吸取冻存液重悬细胞沉淀，吹打均匀后分装至相应的冻存管中，进行冻存；6)细胞保藏：冻存管做HAO标记，放至程序降温盒中，于4℃冰箱放置30min，转移至-80℃超低温冰箱过夜，将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

HOMEC细胞类似产品：：SK-MES细胞、KYSE-510细胞、BEL 7404细胞

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BrCL18细胞类似产品：：MUTZ3细胞、SKMEL-2细胞、VK-2/E6E7细胞

U-138 MG细胞类似产品：：NCIH196细胞、A549/DDP细胞、VMRCRCZ细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

HEK293EBNA细胞类似产品：：OACP4 C细胞、NCIH2110细胞、3AA细胞

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细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装HAO细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结１：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加GAO浓度FBS １５-２０%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结２：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。１、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。２、你的冻存液HAO不HAO，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。３、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过７%，大于５%，太多也不HAO。４、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。５、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。６、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。７、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝Zui后换课题，这个见得太多了，别不当会事。

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LIXC002细胞类似产品：：OCI/AML4细胞、Becker细胞、PC2细胞

F98细胞类似产品：：MC-CAR细胞、YES 2细胞、YAC-1细胞

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Wien-133细胞类似产品：：NCI-322细胞、NL20细胞、NCIH2030细胞

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