J774 Cells(赠送Str鉴定报告)|小鼠巨噬细胞

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细胞背景资料：巨噬细胞；BALB/c

细胞形态：上皮细胞样

体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良HAO(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，Zui后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。

细胞生长：贴壁

P388-D1细胞类似产品：：SCL-I细胞、SU8686细胞、CoCL3细胞

KOSC2细胞类似产品：：TALL-104细胞、SU-DHL2细胞、HGF-1细胞

HO-8910PM细胞类似产品：：3T6细胞、TYKnu细胞、T98G细胞

CA46细胞类似产品：：H-69细胞、C22 (Clara)细胞、Kasumi-6细胞

SW 1353细胞类似产品：：Hs 729.T细胞、WM266-4细胞、alphaTC clone 6细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞培养更HAO经验详解：1)收到细胞，首先要镜检：观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很HAO，观察细胞密度，有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化，很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样，主要是贴壁牢固问题。比如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶子里面，会发生大片的脱落，细胞聚集在一起，但是细胞生长还是正常的，通过离心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的贴壁生长。2)当通过上一步的观察，细胞初步没有问题时，进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中大部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生长期，恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生长期的状态，在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率，和细胞的存活率。3)如果经步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很HAO时，则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶；对于生长较慢，细胞比较薄，状态容易波动的细胞类型，一次少传些，每瓶细胞密度大些，便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞，次处理也可以依照第二种情况。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

HREC细胞类似产品：：H-1672细胞、J.E6-1细胞、PLC-PRF-5细胞

C4-2 B细胞类似产品：：AR41P细胞、EB-3细胞、Panc-813细胞

Earles's cells细胞类似产品：：BC3 H1细胞、OCI-LY-8细胞、NCI-SNU-C2B细胞

H4-II-E-C3细胞类似产品：：Mel-624细胞、CESS细胞、THEECs细胞

Hi-5细胞类似产品：：HCC1438细胞、SNU-C2A细胞、As-PC1细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

Tissue Culture-1细胞类似产品：：CA-46细胞、HCC1419细胞、WC00059细胞

VP 267细胞类似产品：：Statens Seruminstitut Rabbit Cornea细胞、ELD-1细胞、GM03190细胞

HTori 3细胞类似产品：：P3.653细胞、MEC1细胞、PGLH7细胞

REC细胞类似产品：：JROECL21细胞、SUD6细胞、C4-2B细胞

NOK细胞类似产品：：Biologics Standards-Cercopithecus-1细胞、RPMI 1846细胞、DoHH2细胞

Mel RM细胞类似产品：：MFC细胞、HEK-293-F细胞、H2135细胞

购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，原因比较复杂，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳；血清使用错误或血清的品质不佳；解冻过程错误；冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心；悬浑细胞误认为死细胞；培养温度使用错误；细胞置于-８０℃太久等。建议严格参照ATCC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００×g(约１OOOrpm),５-１０分钟，转速过GAO或离心时间过长都将造成细胞死亡。合适的离心转速是根据相对离心力决定。RCF=１.１１９×１０５×r×(rpm)２，其中r为离心机转轴中心与离心套管底部内壁的距离；rpm为离心机每分钟的转数；RCF(relative centrifugal force)为相对离心力，以重力加速度g(９８０.６６cm/s２)的倍数来表示单位。

贴壁消化难题：１，先用PBS 把细胞洗两遍，使瓶内没有血清了，减少对胰酶的中和，然后用新配的０.２５%的胰酶加入３ml左右，放在３７度，然后可以在细胞有些消化下来时，拿着瓶口，运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体，这样细胞很快就下来了，还不需要吹打，分散也均匀；２，成团、絮状：消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象，血清可以终止胰酶的作用，如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉，也可以不倒，直接加血清终止，如果消化液中加入了edta的话，就要将消化液倒干净，如果细胞贴壁要求不是很严格的话，一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强，用０.５%胰酶(含０.１%EDTA)一般要消化１２~１５min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性Zui强)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势)，随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验，则不能弃去胰酶)，加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代，否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片)；消化过度：马上用培养基中和，用吸管吹打细胞，收集全部的细胞到以无菌的离心管中８００RPM ３分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培养，状态不HAO的细胞在培养的过程中会死亡脱落，在换液的时候可以清除掉！

FRTL-5 Cl 2细胞类似产品：：P3X63Ag8.653细胞、HUCEC细胞、MCF-7/AdrR细胞

Onda 11细胞类似产品：：SK-N-BE(2)C细胞、GM02219D细胞、COLO206细胞

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DMS273细胞类似产品：：CF PAC-1细胞、CC-LP-I细胞、P-815细胞

H510A细胞类似产品：：DHL-5细胞、PLB 985细胞、COLO-741细胞

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UK Pan-1细胞类似产品：：HPMEC细胞、DAN-G细胞、RBE4细胞

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KG-1a细胞类似产品：：HVSMC细胞、ROS17/28细胞、QG-56细胞

CA922细胞类似产品：：MOLT4细胞、Mv.1.Lu细胞、SK-N-SH细胞

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SKMES-1细胞类似产品：：PCI-04B细胞、MDBK细胞、GES1细胞

HLEC-B3细胞类似产品：：MOLT 16细胞、BN-CL2细胞、MTEC1细胞

Line 522细胞类似产品：：H4IIEC3细胞、F442-A细胞、hMSC-BM细胞

H1105细胞类似产品：：CHP 126细胞、SW579细胞、D-324MED细胞

CWR22-Rv1细胞类似产品：：P3-X63-Ag8-6-5-3细胞、Hs822T细胞、Panc203细胞

Huh7.5细胞类似产品：：Hs819.T细胞、L-WRN细胞、Mono Mac6细胞

Fukuoka University-Malignant mixed Mullerian Tumor-1细胞类似产品：：Hs600T细胞、NCI-SNU-182细胞、NRK clone 52E细胞

H524细胞类似产品：：MN-60细胞、H1781细胞、GM3569细胞

159 PT细胞类似产品：：T2细胞、MSTO-211 H细胞、SK MES 1细胞

Panc 05.04细胞类似产品：：KMST6细胞、C2C12细胞、U-251 MG细胞

OVCAR-432细胞类似产品：：SK-N-BE细胞、NCI-H920细胞、H2108细胞

Co 205细胞类似产品：：A-72细胞、LC2/Ad细胞、SGC-7901细胞

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