MCF-12F Cells(赠送Str鉴定报告)|人乳腺上皮细胞

"MCF-12F Cells(赠送Str鉴定报告)|人乳腺上皮细胞

细胞背景资料：乳腺上皮细胞；女性

细胞形态：上皮细胞样

【细胞培养中原虫的污染情况总结】原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不HAO，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站YOU势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，Zui终形成恶性循环。污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中(不加细胞)，３７度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗(酸链霉素和苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。１)孵箱应定期用三氧机消毒或者紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水；２)超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素；３)超净台的风机不能过大，风机到６-８格。否则也可能能致霉菌污染；４)无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的喷洒中和，约几小时即可进入操作。

细胞生长：贴壁

GT1-1细胞类似产品：：LY-R细胞、BCaP 37细胞、2B4细胞

OCLY8细胞类似产品：：PF-382细胞、Hs940T细胞、U251MG细胞

TMD-8细胞类似产品：：293-FT细胞、SKNBE-2细胞、CEM-0细胞

Tn5B1-4细胞类似产品：：PC-2 [Human pancreatic carcinoma]细胞、B16/F10细胞、RCC10RGB细胞

SW-948细胞类似产品：：SW 1573细胞、CL-34细胞、SKG-3a细胞

MCF-12F Cells(赠送Str鉴定报告)|人乳腺上皮细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞培养更HAO经验详解：1)收到细胞，首先要镜检：观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很HAO，观察细胞密度，有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化，很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样，主要是贴壁牢固问题。比如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶子里面，会发生大片的脱落，细胞聚集在一起，但是细胞生长还是正常的，通过离心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的贴壁生长。2)当通过上一步的观察，细胞初步没有问题时，进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中大部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生长期，恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生长期的状态，在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率，和细胞的存活率。3)如果经步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很HAO时，则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶；对于生长较慢，细胞比较薄，状态容易波动的细胞类型，一次少传些，每瓶细胞密度大些，便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞，次处理也可以依照第二种情况。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

RMa-bm细胞类似产品：：CT26WT细胞、HEL-92.1.7细胞、HCC2218细胞

U20S细胞类似产品：：GP-293细胞、HNE-1细胞、GA-10(Clone 4)细胞

TE-8细胞类似产品：：Wien-133细胞、Daudi细胞、Wien 133细胞

SNU354细胞类似产品：：NCI522细胞、PK (15)细胞、BN-CL2细胞

MILE SVEN 1细胞类似产品：：AN3 CA细胞、Ha Fe细胞、GM04154细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

MCF-12F Cells(赠送Str鉴定报告)|人乳腺上皮细胞

细胞生长特性：贴壁

HIT-T15细胞类似产品：：SMA560细胞、H747细胞、SNU886细胞

AG06814-N细胞类似产品：：H-838细胞、SKNO1细胞、TE8细胞

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DMS 79细胞类似产品：：SH-SY5Y Parental细胞、Cates-1B细胞、HN6细胞

KMST-6细胞类似产品：：DF-1细胞、TK+/- (clone 3.7.2C)细胞、NCIH441细胞

MHCC 97细胞类似产品：：LL2细胞、EL-4细胞、MDA-kb2细胞

如何进行细胞复苏：１)从液氮容器中取出冻存管，直接浸入３７℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；２)从３７℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加１０倍以上培养液，混匀；３)离心，１０００rpm，５min；４)弃去上清液，加入含１０%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，３７℃培养箱静置培养；５)次日更换一次培养液，继续培养。【温馨提醒】１)从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但ZuiHAO为对数生长期细胞。在冻存前一天ZuiHAO换一次培养液；２)将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做HAO防护工作(戴棉手套)，以免冻伤；３)冻存和复苏ZuiHAO用新配制的培养液。细胞复苏的时候，有些初次实验员将冻存管从液氮中取出后，放在室温下，经常发生冻存管爆炸，该怎么避免出现这种情况吗？其中在拧紧冻存管的时候是否有哪些细节要注意的？一般常用的方法是取出冻存管后在超净工作台中用酒精棉球擦试管口，再稍拧松盖子，再放３７度水浴锅中摇溶，在将细胞转移到装有３７度预热过的培养基的试管中，迅速离心，再用培养基洗一遍。

细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结１：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加GAO浓度FBS １５-２０%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结２：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。１、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。２、你的冻存液HAO不HAO，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。３、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过７%，大于５%，太多也不HAO。４、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。５、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。６、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。７、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝Zui后换课题，这个见得太多了，别不当会事。

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LOU-NH-91细胞类似产品：：MCF-7/AdrR细胞、SUP-M2细胞、C-33-A细胞

NOZC-1细胞类似产品：：F442A细胞、MFE-280细胞、Hs 636.T细胞

Panc 04.03细胞类似产品：：Mono-Mac-1细胞、T2(174 x CEM.T2)细胞、L428细胞

HPDEC细胞类似产品：：COLO_320DM细胞、Jurkat Clone E6-1细胞、HRGEC细胞

CHL1细胞类似产品：：MBMEC细胞、NCI-H220细胞、MDA157细胞

T24细胞类似产品：：KCL22S细胞、GA-10细胞、UCLA-RO 81细胞

HCC0827细胞类似产品：：RPMI-8402细胞、3 LL细胞、IBRS-2细胞

GCT0404细胞类似产品：：HS766T细胞、KYSE180细胞、FAK+/+细胞

624 MEL细胞类似产品：：SNUC1细胞、HCT GEO细胞、LMTK-细胞

ROS-17/2.8细胞类似产品：：MDA2B细胞、SNU-484细胞、HBZY 1细胞

COS1细胞类似产品：：MDA-MB-468-RED细胞、NIH/3T3细胞、NCI-H1963细胞

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