B16-BL6 Cells(赠送Str鉴定报告)|小鼠黑色素瘤细胞

"B16-BL6 Cells(赠送Str鉴定报告)|小鼠黑色素瘤细胞

细胞背景资料：黑色素瘤；雄性；C５７BL/６

细胞形态：上皮细胞样

细胞接收操作说明：请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。本公司细胞发货有四种形式：T２５培养瓶(一般是贴壁细胞使用，悬浮细胞也可以)、离心管(悬浮细胞使用多，当然，有些公司也会用这种离心管形式发贴壁细胞，但是，长期经验来说，贴壁细胞容易发生形态变化，估计是细胞培养空间狭小，血清不足导致(Zui主要是怕运输延误导致这些情况发生)，个人不建议用离心管形式发贴壁细胞)及干冰(冻存细胞用，主要是冬天天气冷，温度低于４℃的地方，都要考虑冻存细胞)。T２５培养瓶：是用T２５细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T２５培养瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷７５%酒精消毒后显微镜观察细胞状态(有条件可以拍下此时细胞照片)。将细胞放入３７度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T２５中培养基取出装HAO备用，如细胞密度GAO于８０%，可以直接消化传代，相反则加入５-６ml培养基放回培养箱继续培养即可。离心管：是用１５ml离心管发货的形式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入３７度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T２５中培养基取出装HAO备用(如果实验室没有T２５培养瓶，可以暂时T７５培养瓶，加入１０-１５ml培养基，建议１０ml培养基，也可以使用T１７５培养瓶，加入５０-６０ml培养基，培养瓶越大，需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话，ZuiHAO不用大瓶子，先用小瓶子养起来再换大的，不然会长得很慢，严重的，会导致细胞死亡等危险)，平衡完成后，离心(１０００rpm，３min)收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。干冰：是用本公司冻存液冻存细胞后，直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。

细胞生长：贴壁

ONS76细胞类似产品：：TCam 2细胞、He-La细胞、MG63细胞

Biologics Standards-Cercopithecus-1细胞类似产品：：H-810细胞、KAT-5细胞、MB39细胞

RPMI 7951细胞类似产品：：X63.Ag8.653细胞、BEAS 2B细胞、SU-DHL-4细胞

SKRC-20细胞类似产品：：NCI-H2342细胞、JOSK-M细胞、SUM 52细胞

UMR106细胞类似产品：：TGW-nu细胞、Panc203细胞、Mouse INsulinoma 6细胞

B16-BL6 Cells(赠送Str鉴定报告)|小鼠黑色素瘤细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

预防细胞污染的注意事项：实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容器打开后，倾斜45°操作，操作完成后及时盖上瓶盖。CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

SK-OV-3细胞类似产品：：WM-239-A细胞、TCMK1细胞、NCIH2405细胞

NCI H548细胞类似产品：：HCC 38细胞、MDAMB175VII细胞、AQ-Mel细胞

H295R细胞类似产品：：Mia PACA 2细胞、MM134细胞、H660细胞

Fortner's melanotic melanoma #3细胞类似产品：：C4I细胞、AR4-IP细胞、NCI-H2347细胞

H-2198细胞类似产品：：KMS-11细胞、NCCIT细胞、JJN-3细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

B16-BL6 Cells(赠送Str鉴定报告)|小鼠黑色素瘤细胞

细胞生长特性：贴壁

SK-N-MC细胞类似产品：：Panc-02细胞、TE354T细胞、MDA-MB231细胞

LC-2/ad细胞类似产品：：TE-85 clone 5细胞、SDBMSC细胞、AG 9细胞

NOR 10细胞类似产品：：Capan1细胞、CTX TNA2细胞、Hut292细胞

Tj-905细胞类似产品：：GH 3细胞、COLO678细胞、mousepodocyte细胞

KYSE 270细胞类似产品：：HOP92细胞、Hs739T细胞、G-361细胞

BCP-1细胞类似产品：：P3X63Ag8-6-5-3细胞、High-5细胞、H-810细胞

细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)：１)吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加２-３ml ０.２５%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在１-２min)；２)镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散；３)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；４)注意培养基PH值变化情况，定期换液(每周２-３次)，待细胞密度达到８０%以后重复１项操作或者冻存；别注意：(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养)１)收到细胞后请尽快更换为含１５%血清的新鲜培养基，如因殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加１０%的血清，(原瓶培养基的继续使用时间Zui长不宜超过７２小时)；２)贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请YOU先选择直径６cm的培养皿进行传代培养；３)如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做HAO照片记录并联系实验室。

细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结１：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加GAO浓度FBS １５-２０%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结２：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。１、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。２、你的冻存液HAO不HAO，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。３、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过７%，大于５%，太多也不HAO。４、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。５、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。６、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。７、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝Zui后换课题，这个见得太多了，别不当会事。

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3AA细胞类似产品：：Centre Antoine Lacassagne-12T细胞、LN299细胞、F9细胞

OVCAR 8细胞类似产品：：CCRF-CEM/S细胞、Ball 1细胞、JIMT细胞

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DoTc2细胞类似产品：：Hs 688(A).T细胞、FU-OV-1细胞、MV4:11细胞

ROS17/28细胞类似产品：：Immortalized Human Hepatocytes细胞、MC57G细胞、IGROV-1细胞

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L细胞类似产品：：PMVEC细胞、DU-4475细胞、NCI-SNU-668细胞

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H747细胞类似产品：：SUD-4细胞、MDA MB 231细胞、SUM-52PE细胞

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Ca761细胞类似产品：：NCIH2170细胞、ST细胞、PTK 1细胞

HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]细胞类似产品：：Y3M细胞、HPAF2细胞、MLM细胞

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A2780/Taxol细胞类似产品：：RT112细胞、OVMANA细胞、HSC/mHSC细胞

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P3 NS1 Ag4/1细胞类似产品：：OLN93细胞、Panc 2.03细胞、H-740细胞

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WI 38细胞类似产品：：GM-346细胞、MOLT-4细胞、Okayama University Medical School-27细胞

L-428细胞类似产品：：NBLS细胞、SKGIIIA细胞、SNU-638细胞

HCC1008细胞类似产品：：HCC1588细胞、REC细胞、SNU-16细胞

T2 (174 x CEM.T2)细胞类似产品：：Bowes melanoma cells细胞、NCIH2347细胞、GP2d细胞

HIT T15细胞类似产品：：SuDHL 8细胞、DH82细胞、TCMK-1细胞

HA1800细胞类似产品：：HUSMC细胞、SUDHL-10细胞、K7M2-WT细胞

NCI-H1838细胞类似产品：：A3细胞、Strain V细胞、B16细胞

H-841细胞类似产品：：SUM 102PT细胞、MES-SA细胞、CEM/0细胞

L5178Y-R细胞类似产品：：mIMCD3细胞、RT-BM细胞、HK2细胞

GM3569细胞类似产品：：P3.NS-1/1.Ag4.1细胞、MDA-MB361细胞、KNS-81细胞

BRL 3A细胞类似产品：：PFSK细胞、HCC366细胞、M210B4细胞

EM3细胞类似产品：：WISH细胞、NCIH520细胞、SAOS 2细胞

3T3-442A细胞类似产品：：SK-MEL-MeWo细胞、H-4-II-E细胞、MN 60细胞

CWR22R细胞类似产品：：3T3-442A细胞、H283细胞、Hep G2/C3A细胞

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