HMC3 Cells(赠送Str鉴定报告)|人小胶质细胞

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细胞背景资料：小胶质细胞；SV４０转化

细胞形态：上皮细胞样

解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：１)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够GAO，考虑到这一损失。起始浓度为１*１０(６)至１*１０(７)细胞/毫升；２)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷冻的培养物，保存时间为１-５天，但这不是保存的方法。在３７℃充分解冻后应立即开始培养；３)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在２４小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期；４)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。

细胞生长：贴壁

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

悬浮细胞不容易转染：悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞GAO出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提GAO悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，ZuiHAO选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到Zui低，悬浮细胞不易转染，选对试剂及良HAO的细胞培养环境才是关键。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

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细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

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为什么培养的细胞要及时传代？体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。培养细胞生长减慢的原因在哪些?其解决办法有哪些？可能的原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷眈肢或生长因子等耗尽或缺乏或己被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清等，找出其它可能的原因。解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷酷肢或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，去弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培养液需在２-８℃避光保存;含血清完全培养液在２-８℃保存，并在２周内用完;分离培养物，检测支原体。冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入３７℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在１-２分钟内大部分融化，别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用７５%酒精消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管爆裂。

细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结１：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加GAO浓度FBS １５-２０%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结２：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。１、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。２、你的冻存液HAO不HAO，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。３、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过７%，大于５%，太多也不HAO。４、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。５、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。６、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。７、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝Zui后换课题，这个见得太多了，别不当会事。

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TE-9细胞类似产品：：DMS-79细胞、MCF/Adr细胞、ECC10细胞

L cell细胞类似产品：：C38细胞、CHO-K1细胞、Hep-G2细胞

DHL-2细胞类似产品：：Normal Rat Kidney细胞、PL11细胞、Fu97细胞

B16F10细胞类似产品：：CFPAC细胞、SupB15WT细胞、NB1RGB细胞

HSAS4细胞类似产品：：A 2058细胞、C8166细胞、MDA-MB-134VI细胞

L428细胞类似产品：：Roswell Park Memorial Institute 2650细胞、BrCL12细胞、LS 180细胞

MDA-MB468细胞类似产品：：MDA MB 453细胞、Farage细胞、BpRc1细胞

HSKMC细胞类似产品：：C8166-CD4细胞、NCI-H187细胞、Pa17C细胞

Daoy细胞类似产品：：B 95-8细胞、SUM159细胞、MLA 144细胞

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