TKB-1 Cells(赠送Str鉴定报告)|人肺癌细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良HAO(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，Zui后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。

细胞生长：贴壁

SUP-B1细胞类似产品：：RPMI 7951细胞、Hep-G2细胞、SKLMS1细胞

EC-GI细胞类似产品：：MV-3细胞、PK13细胞、293-GP细胞

Human Embryo Lung-1细胞类似产品：：H-1437细胞、SKNBE(1)细胞、TKB-1细胞

DiFi细胞类似产品：：SUDHL10细胞、MLM细胞、8305C细胞

C918细胞类似产品：：BNL CL.2细胞、HCT-15细胞、MDA435细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，ZuiHAO经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

Y-1细胞类似产品：：Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2细胞、Panc4.03细胞、HEC251细胞

CAL-62细胞类似产品：：mRMEC细胞、KYSE180细胞、HS766T细胞

CCRF-SB细胞类似产品：：RT-BM 1细胞、NS1-1 Ag4.1细胞、C12细胞

HS-766-T细胞类似产品：：HuCCT-1细胞、COLO 394细胞、ONS-76细胞

SNU398细胞类似产品：：G 401细胞、SKUT-1细胞、SK-N-BE(2)-C细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分

CWR22Rv1细胞类似产品：：NCI-H2110细胞、Det 562细胞、HME-1细胞

MD Anderson-Metastatic Breast-415细胞类似产品：：GM17219细胞、UACC-812细胞、D-324 Med细胞

LK 2细胞类似产品：：MZ-CRC-1细胞、LADMAC细胞、J774 A1细胞

18G3.cl 1细胞类似产品：：SNU-216细胞、NCI H157细胞、SKGIIIA细胞

NCIH1944细胞类似产品：：KMM1细胞、H295R-S1细胞、HCC9204细胞

IPECJ2细胞类似产品：：EOC-20细胞、CAL-12T细胞、Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma细胞

细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装HAO细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结１：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加GAO浓度FBS １５-２０%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结２：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。１、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。２、你的冻存液HAO不HAO，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。３、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过７%，大于５%，太多也不HAO。４、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。５、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。６、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。７、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝Zui后换课题，这个见得太多了，别不当会事。

SRA 01/04细胞类似产品：：HN4细胞、CEM-0细胞、MC38细胞

293c18细胞类似产品：：NCIH23细胞、UO31细胞、BC-023细胞

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SW 982细胞类似产品：：Danio rerio Gill细胞、UWB1.289细胞、WERI-Rb 1细胞

H345细胞类似产品：：NPC-TW039细胞、UMR106细胞、P3-X63-Ag8细胞

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H209细胞类似产品：：HN6细胞、SKHEP1细胞、SPCA1细胞

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U20S细胞类似产品：：GP-293细胞、HNE-1细胞、GA-10(Clone 4)细胞

NCI H508细胞类似产品：：NB9细胞、NK-92.05细胞、J45.01细胞

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HCC1954 BL细胞类似产品：：Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50细胞、HPC-Y5细胞、SW 900细胞

HLF细胞类似产品：：HSC-T6细胞、NCI-H774细胞、SW-1222细胞

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NIH:OVCAR3细胞类似产品：：NRK 52E细胞、Epstein-Barr-2细胞、SR细胞

RT-BM-1细胞类似产品：：HUC-1细胞、HCC1806细胞、GM 2132细胞

NCIH1155细胞类似产品：：LS 1034细胞、IEC18细胞、Opossum Kidney细胞

TFK1细胞类似产品：：ID8细胞、H520细胞、HCC1143细胞

95D细胞类似产品：：OCUM-1细胞、C4-2细胞、NTHY-ORI3.1细胞

Michigan Cancer Foundation-10A细胞类似产品：：ST486细胞、VP303细胞、3T3-J2细胞

PZ-HPV-7细胞类似产品：：NCI-SNU-216细胞、174xCEM.T2细胞、HEK-293FT细胞

MFM223细胞类似产品：：TMD8细胞、Hepatoma 22细胞、P3J-HR-1细胞

HOP-92细胞类似产品：：L-WRN细胞、SCC25细胞、LA-N-6细胞

HAVSMC细胞类似产品：：HCC95细胞、P3/NS1/1-Ag4-1细胞、Colon-38细胞

IMR 32细胞类似产品：：RenCa细胞、MDA-MB-134 VI细胞、H1048细胞

Capan2细胞类似产品：：H-460细胞、KMB 17细胞、DI TNC1细胞

CT26WT细胞类似产品：：RAW-264.7细胞、Lung cancer-1/squamous细胞、BALB/3T3 (clone A31)细胞

NIH 3T6细胞类似产品：：CP70细胞、NCI-H2171细胞、MeT-5A细胞

PAMC82细胞类似产品：：mousepodocyte细胞、HS-729细胞、HEK-EBNA细胞

DR2R1610细胞类似产品：：Roswell Park Memorial Institute 6666细胞、HL-7702细胞、U-87-MG细胞

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