686LN-M4e Cells(赠送Str鉴定报告)|人喉癌细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些殊的细胞和分化征。传代细胞形成细胞株的Zui大利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。【操作步骤】１)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；２)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；３)置３７℃孵箱或室温(２５℃温度)下进行消化，２~５min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；５)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；６)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO２培养箱中进行培养；７)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般２～３d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。【注意事项】１)掌握HAO细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤；２)掌握HAO消化浓度，当消化液浓度过GAO时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。

细胞生长：贴壁

HT-29细胞类似产品：：HS578细胞、HBL-1 [Human diffuse large B-cell lymphoma]细胞、HcerEpic细胞

Dami细胞类似产品：：H-1954细胞、SK-NMC细胞、U-138MG细胞

HEK 293细胞类似产品：：WM266细胞、PaTu8988s细胞、LN382细胞

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Hs-729-T细胞类似产品：：RPMI8226细胞、OCILY-10细胞、MM96L细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

悬浮细胞不容易转染：悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞GAO出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提GAO悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，ZuiHAO选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到Zui低，悬浮细胞不易转染，选对试剂及良HAO的细胞培养环境才是关键。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

SK-GT-4细胞类似产品：：6-10B细胞、H1963细胞、M2-10B4细胞

RPMI8226细胞类似产品：：TERT-RPE1细胞、PLA801-95C细胞、LIPF178C细胞

SCLC-21H细胞类似产品：：SPCA-1细胞、NCIH2107细胞、231-luc细胞

Sp 2/0-Ag 14细胞类似产品：：SHP77细胞、MC3T3E1细胞、MX1细胞

LTPA细胞类似产品：：NCIH244细胞、HT-55细胞、NCIH1299细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分

HBVP细胞类似产品：：NCIH1793细胞、Panc-8_13细胞、Reuber H35细胞

OCI Ly1细胞类似产品：：NCIH1437细胞、P3X63 Ag8.653细胞、SUDHL-2细胞

HLMVEC细胞类似产品：：MKN 7细胞、ML-2细胞、HPaSteC(HPSC)细胞

DMS 114细胞类似产品：：MDAMB175VII细胞、BrCL12细胞、Roswell Park Memorial Institute 1846细胞

NCI-H1155细胞类似产品：：H-146细胞、MDCK-II细胞、RSMC细胞

32D clone3细胞类似产品：：A9细胞、4T1-A细胞、PANC-02-03细胞

购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，原因比较复杂，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳；血清使用错误或血清的品质不佳；解冻过程错误；冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心；悬浑细胞误认为死细胞；培养温度使用错误；细胞置于-８０℃太久等。建议严格参照ATCC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００×g(约１OOOrpm),５-１０分钟，转速过GAO或离心时间过长都将造成细胞死亡。合适的离心转速是根据相对离心力决定。RCF=１.１１９×１０５×r×(rpm)２，其中r为离心机转轴中心与离心套管底部内壁的距离；rpm为离心机每分钟的转数；RCF(relative centrifugal force)为相对离心力，以重力加速度g(９８０.６６cm/s２)的倍数来表示单位。

细胞冻存复苏材料与方法步骤：常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有３５L和５０L两种。使用时要注意以下几点：(１)一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-１９６℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。(２)液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。(３)在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更HAO。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。细胞冻存时常备的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(１２１°C蒸气GAO压消毒)，２mL安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。主要操作步骤为：(１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天ZuiHAO换液。将多个培养瓶中的细胞培养 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为３×１０６～１×１０７/mL之间。(３)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装１～１.５mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记HAO细胞名称和冻存日期，同时作HAO登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(４)将装HAO细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入４℃冰箱中２～３小时，再移至冰箱冷冻室内３～４小时，再吊入液氮容器颈气态部分存放２小时，Zui后沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，ZuiHAO取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

GI-1细胞类似产品：：SUDHL-10细胞、SW-1088细胞、National Medical Center-Glioma 1细胞

293 c18细胞类似产品：：NCI-SNU-668细胞、HPAF-I细胞、A431/P细胞

FM88细胞类似产品：：BaF3细胞、NCTC-1469细胞、SKO007细胞

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RD 2细胞类似产品：：SACCLM细胞、PANC-10-05细胞、COLO-HSR细胞

H2330细胞类似产品：：MeT-5A细胞、OEC19细胞、hTERTHME1细胞

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PAEC细胞类似产品：：HCT-8/V细胞、293/EBNA-1细胞、2B4-L细胞

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