KMST-6 Cells(赠送Str鉴定报告)|人胚成纤维细胞

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细胞背景资料：胚成纤维细胞；女性

细胞形态：成纤维细胞样

接收细胞相关问题：如不能在收到细胞后及时操作细胞，T２５及离心管发货的细胞将可以消毒后在３７度过夜，血清发货的细胞在室温下静置１-２天(注意不要放冰箱)，干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-８０度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。T２５瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T２５瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心(１２００rpm，５min)后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心(１０００rpm，３min)收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。

细胞生长：贴壁

MHCC-LM3细胞类似产品：：C-28I2细胞、JROECL19细胞、Hs934T细胞

HR8348细胞类似产品：：DHL10细胞、LS174T细胞、DMS153细胞

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Ketr-3细胞类似产品：：C42细胞、CCD 966SK细胞、MES-SA/Dx5细胞

T-HSC细胞类似产品：：SNU-119细胞、Leghorn Male Hepatoma cell line细胞、ROS17/2.8细胞

KMST-6 Cells(赠送Str鉴定报告)|人胚成纤维细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞培养过程中，总是会出现各种意想不到的问题，一不留神就会全盘皆输。所谓细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。下面是贴壁细胞的保藏方法，希望对细胞培养初学操作者有所帮助：1)观察细胞状态：贴壁细胞密度达到85-90%，即可以细胞冻存形式进行保藏，拍照，记录细胞状态；2)细胞清洗：培养皿表面消毒后，转移至生物安全柜中，去除培养皿中培养液，加入12mlPBS，轻轻摇晃培养皿清洗细胞，随后吸除PBS清洗液；3)细胞消化：将2ml胰酶加入培养皿中，完全覆盖细胞，置于显微镜下观察（期间禁止摇晃培养皿），当细胞刚开始脱落时，立即转移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余约0.5ml胰酶，转移至培养箱内继续消化，每30秒肉眼观察细胞状态，至细胞成流沙状完全脱落，转移至生物安全柜中，加入12ml完全培养基，终止消化；4)细胞离心：将终止消化后的细胞悬液吹打均匀，吸取至15ml离心管中，1000r/min（110g），离心3min；5)细胞冻存：离心后去除细胞上清液，按照冻存细胞量5*10^5/ml，吸取冻存液重悬细胞沉淀，吹打均匀后分装至相应的冻存管中，进行冻存；6)细胞保藏：冻存管做HAO标记，放至程序降温盒中，于4℃冰箱放置30min，转移至-80℃超低温冰箱过夜，将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

MES 13细胞类似产品：：MCA38细胞、HLEB-3细胞、SUM 149PT细胞

IMR 90细胞类似产品：：SNU-398细胞、SCLC-21H细胞、Sp2/mIL-6细胞

Hs-675-T细胞类似产品：：HO8910细胞、C4 I细胞、RPMI-8226S细胞

HCT116细胞类似产品：：Rat podocyte细胞、MKN 45细胞、SK-N-BE(2)C细胞

JVM3细胞类似产品：：NCI-SNU-761细胞、MDA-MB-231细胞、SH-SY5Y细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

NCI-H2073细胞类似产品：：Gerner 7666细胞、HS-68细胞、B35细胞

SNUC2A细胞类似产品：：A 549细胞、Panc_02_03细胞、Michigan Cancer Foundation-12A细胞

U87MG细胞类似产品：：OE-19细胞、EFM-192C细胞、BHK 21细胞

FDC-P1细胞类似产品：：CMT-93细胞、NCTC clone 929细胞、COLO 829细胞

KYSE270细胞类似产品：：2780CP细胞、P3JHR1细胞、BALB/3T3细胞

NCI-ADR-RES细胞类似产品：：Wayne State University-Head and Neck 13细胞、RPMI1846细胞、WEHI164细胞

细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)：１)吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加２-３ml ０.２５%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在１-２min)；２)镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散；３)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；４)注意培养基PH值变化情况，定期换液(每周２-３次)，待细胞密度达到８０%以后重复１项操作或者冻存；别注意：(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养)１)收到细胞后请尽快更换为含１５%血清的新鲜培养基，如因殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加１０%的血清，(原瓶培养基的继续使用时间Zui长不宜超过７２小时)；２)贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请YOU先选择直径６cm的培养皿进行传代培养；３)如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做HAO照片记录并联系实验室。

正确的细胞复苏需知事项：细胞冻存HAO了，接下来要注意什么问题呢？没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢？细胞活力和形态检查的作用何在？活力检查——千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!形态检查——检查细胞的固有形态和生长行为。冻存细胞：补充新的培养液——在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至７０%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根据不同的细胞类型调整)；冻存液——用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择Zui合适的冻存液(常用的冻存液成分有)：５-１０% DMSO——注意确保DMSO不含有其他的毒性物质；５-１５%甘油；如果细胞在无血清培养基内生长，应在５０%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长２４小时)内冻存和复苏。在冻存管上标记HAO细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过１.５ml。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以Zui快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤ZuiHAO使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做HAO记录是非常非常重要的！还有一个Zui重要的，一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞，以免其中的一个液氮罐出现问题！细胞正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，熟记以下要点：当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要；其实，细胞复苏只是一个简单的实验，不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节，不然，也不一定会尽如人意。例如说，人身健康方面：一定要记得做HAO防冻工作，戴上护目镜；尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。

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SACC83细胞类似产品：：BMSCs（mBMSCs）细胞、MLMA细胞、SF17细胞

RCC-JF细胞类似产品：：HUVEC-C[HUVEC]细胞、T47D细胞、EFM19细胞

MCA38细胞类似产品：：U-hth74细胞、DMS 273细胞、P3/NSI/1-AG4-1细胞

Stanford University Pediatric T-cell line 1细胞类似产品：：SK-MES1细胞、P3.653细胞、Human Embryonic Skin细胞

Leukemia 1210细胞类似产品：：293T细胞、CL 1-0细胞、U-2OS细胞

U-226AR1细胞类似产品：：H-1417细胞、U-937细胞、WML2细胞

Hs 294T细胞类似产品：：NTERA-2 clone D1细胞、OVCAR.5细胞、CHL细胞

CHL1细胞类似产品：：MBMEC细胞、A-704细胞、HSCT6细胞

HEL-92.1.7细胞类似产品：：H-35 Reuber细胞、AU-Mel细胞、MAntle cell VERona-1细胞

UACC893细胞类似产品：：H-841细胞、GM3569细胞、A673细胞

GM03320D细胞类似产品：：MDCKII-WT细胞、HEL细胞、Colon26细胞

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