Toledo Cells(赠送Str鉴定报告)|人皮肤T淋巴细胞瘤细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：淋巴母细胞样

体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良HAO(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，Zui后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。

细胞生长：悬浮

NCIH524细胞类似产品：：SDBMSC细胞、MDA-415细胞、Kit225细胞

PLA-802细胞类似产品：：BC-025细胞、H1930细胞、SK-ChA1细胞

Human ErythroLeukemia细胞类似产品：：EBC-1细胞、LAN6细胞、GM3570细胞

T-24细胞类似产品：：SK-ML2细胞、Walker 256细胞、BL-6细胞

AX-Mel细胞类似产品：：TCMK-1细胞、OCUM-1细胞、AE 1201细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

传代的操作步骤注意事项：1)操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。2)点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。3)操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。4)不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。5)瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。贴壁细胞传代的操作步骤：1)吸除培养瓶内旧培养液。2)向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。3)置温箱中2-5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。4)吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。5)用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。6)计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。悬浮细胞传代的操作步骤：1)吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5分钟。2)吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

细胞传代方法：每２-３天换液

HUTU80细胞类似产品：：SK-LMS-1细胞、IPECJ2细胞、PCI-SG231细胞

EOC-20细胞类似产品：：SU-DHL-10细胞、KYSE-30细胞、MTC-TT细胞

HCT GEO细胞类似产品：：ISHI细胞、Rainbow Trout Embryo细胞、T_T_细胞

SW 1271细胞类似产品：：J774 A1细胞、T-T细胞、COLO-699细胞

BI-Mel细胞类似产品：：KHYG-1细胞、SkChA1细胞、SW.620细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：悬浮生长 

SKCO-1细胞类似产品：：FAT细胞、EU-3细胞、293GP细胞

HCC-1359细胞类似产品：：SUM-159PT细胞、NIH:OVCAR-4细胞、Karpas-299细胞

BC-PAP细胞类似产品：：NMCG-1细胞、QG56细胞、WM 239A细胞

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B-16细胞类似产品：：SU-86-86细胞、U-2 OS细胞、H1975细胞

为什么培养的细胞要及时传代？体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。培养细胞生长减慢的原因在哪些?其解决办法有哪些？可能的原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷眈肢或生长因子等耗尽或缺乏或己被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清等，找出其它可能的原因。解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷酷肢或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，去弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培养液需在２-８℃避光保存;含血清完全培养液在２-８℃保存，并在２周内用完;分离培养物，检测支原体。冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入３７℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在１-２分钟内大部分融化，别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用７５%酒精消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管爆裂。

细胞传代培养实验：体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以１:２或１:３以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养；细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增３～６次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数/１００个细胞。一般细胞分裂指数介于０.２％～０.５％，肿瘤细胞可达３～５％；细胞接种２～３天分裂增殖旺盛，是活力ZuiHAO时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。实验步骤：１.将长成的培养细胞从二氧化碳培养箱中取出，在超净工作台中倒掉瓶内的培养液，加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜)，静置５～１０分钟。２.在倒置镜下观察被消化的细胞，如果细胞变圆，相互之间不再连接成片，这时应立即在超净台中将消化液倒掉，加入３～５ml新鲜培养液，吹打，制成细胞悬液。３.将细胞悬液吸出２ml左右，加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加３ml左右培养液，盖HAO瓶塞，送回二氧化碳培养箱中，继续进行培养。一般情况，传代后的细胞在２小时左右就能附着在培养瓶壁上，２～４天就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代。

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BNL CL.2细胞类似产品：：TF1细胞、JURKAT E-6.1细胞、Colo-206F细胞

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