NCI-H209:人小细胞肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

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细胞生长：贴壁

可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态HAO与不HAO至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺HAO的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更HAO一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

SW 837细胞类似产品：：NCIH2122细胞、NCM-460细胞、Kasumi-1细胞

MAVER1细胞类似产品：：SNU-761细胞、HuNS1细胞、FF-WT-BJ细胞

RT-BM细胞类似产品：：DHL6细胞、H-740细胞、OKAC1细胞

2B4-L细胞类似产品：：SKNF1细胞、Hs 343.T细胞、GM04680细胞

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞背景资料：详见相关文献介绍

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细胞形态：上皮细胞样

SW-1573细胞类似产品：：MDBK (NBL-1)细胞、IM 9细胞、NR 8383细胞

SkMel31细胞类似产品：：CWR22R-V1细胞、LS-174细胞、32D:cl3细胞

NCIH596细胞类似产品：：Tu-212细胞、NCIH2066细胞、CL1细胞

细胞传代培养的胰酶消化法：传代培养：是指细胞从一个培养瓶以１：２或１：２以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤：①入无菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒双手；②倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液３７℃下预热；③超净台台面应整洁，用７５%酒精棉球擦拭清洁；④打开超净工作台的紫外灯照射台面２０min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧；⑤点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内；⑥将培养用液瓶口用７５%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上；⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每个大培养瓶加入１ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖HAO瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化HAO的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖HAO瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO２的进入，将培养瓶放回CO２培养箱；⑩对悬浮培养细胞，步骤７-９不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。

细胞传代方法：１：２-１：４传代；每周换液２次。

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：悬浮生长，有少数细胞疏松贴壁

贴壁细胞传代：去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000rpm/min室温离心5min；弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶补足培养基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培养。悬浮细胞传代：一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min 室温离心5min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培养液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良HAO，当补液时，需避免反复吹打。

UPCI:SCC90细胞类似产品：：Jurkat (clone E6-1)细胞、NCIH1155细胞、GM00637B细胞

D-341Med细胞类似产品：：MT2细胞、hTERT-HPNE细胞、RPMI #8226细胞

BMU-S1细胞类似产品：：Caco 2细胞、NCI-H1781细胞、SW 982细胞

OVCA5细胞类似产品：：PANC-10-05细胞、ML2细胞、MDA-MB-134-VI细胞

MFE280细胞类似产品：：EBC1细胞、MG-63细胞、BaF3细胞

CAL78细胞类似产品：：MFE-296细胞、Hs 737.T细胞、OEC19细胞

MCF-7ADR细胞类似产品：：Walker-Ca.256细胞、KASUMI1细胞、EJ 138细胞

HMO6细胞类似产品：：NG 108-15细胞、CNE2Z细胞、H-378细胞

RIN-m5F细胞类似产品：：NCIN87细胞、CCC-HHM-2细胞、639V细胞

EBC1细胞类似产品：：Panc 04.03细胞、NK 10a细胞、KNS-62细胞

SKMel-5细胞类似产品：：WC00097细胞、Hepatoma-22细胞、HL-1细胞

PAI细胞类似产品：：UPCISCC090细胞、MS751细胞、H1404细胞

HIT clone T15细胞类似产品：：NL20细胞、SVEC4-10细胞、NW-38细胞

3396细胞类似产品：：MDA MB 361细胞、Panc 05.04细胞、PC-3M-2B4细胞

TEC细胞类似产品：：BNL.CL2细胞、SK Mel 2细胞、LM3细胞

Bovine Turbinate细胞类似产品：：MARC-145细胞、TCC-PAN2细胞、RPMI-1846细胞

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H-920细胞类似产品：：JVM3细胞、SNU475细胞、NCIH2052细胞

H2085细胞类似产品：：Epstein-Barr-1细胞、MC3T3, E1 subgroup-4 clone细胞、H1618细胞

CL 1-5细胞类似产品：：PANC-1细胞、H-1563细胞、IBMF-7细胞

SW780细胞类似产品：：TOV-21G细胞、EB3 [Human Burkitt lymphoma]细胞、Vero E6细胞

SK MEL-28细胞类似产品：：Mv 1 Lu细胞、SK-ChA1细胞、RGCs细胞

PC 12细胞类似产品：：RPMI-2650细胞、RPMI 6666细胞、SKN-SH细胞

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PG-4 S+L-细胞类似产品：：PLMVEC细胞、SW-780细胞、HSC-3细胞

KOSC-2细胞类似产品：：OAW42细胞、Mel-MeWo细胞、T-ALL-1细胞

NCI-441细胞类似产品：：SGC-996细胞、HCC-1569细胞、A 253细胞

Bac1 2F5细胞类似产品：：X63Ag8.653细胞、PanC1细胞、Hu-P-T4细胞

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JM1细胞类似产品：：MG-HU-3细胞、MOLT 4细胞、S3-HeLa细胞

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NCI-H209:人小细胞肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

LNCaP-ATCC细胞类似产品：：MLA 144细胞、Japanese Tissue Culture-28细胞、P3HRI细胞

BRL 3A细胞类似产品：：PFSK细胞、UO.31细胞、HCC1954BL细胞

Transformed Human Liver Epithelial-2细胞类似产品：：OKT3细胞、MOLM-13细胞、RAW264细胞

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7860细胞类似产品：：HPAF II细胞、IMR90细胞、RS411细胞

GM0637细胞类似产品：：SUM149细胞、TOV112D细胞、Leukemic 1210细胞

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