NCI-H2066:人肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

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细胞生长：贴壁

可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态HAO与不HAO至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺HAO的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更HAO一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

Lymph Node Carcinoma of the prostate细胞类似产品：：H-1623细胞、H-719细胞、OVSAHO细胞

293EBNA细胞类似产品：：GM-3573细胞、A375-MEL细胞、Hs-281-T细胞

Hs 606细胞类似产品：：L132细胞、NCI-H2081细胞、NTERA-2 clone D1细胞

L- cell细胞类似产品：：UMR 106细胞、32D CL3细胞、SK MEL-28细胞

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞背景资料：详见相关文献介绍

NCI-H2066:人肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

细胞形态：上皮细胞样

SNU886细胞类似产品：：Huh 7.5细胞、SNU-719细胞、Hu-P-T3细胞

HNE1细胞类似产品：：RINm5F细胞、TE-14细胞、AX-Mel细胞

TOV-21G细胞类似产品：：H22-H8D8细胞、H865细胞、SNU-251细胞

目前，跟公司签订长期战略合作伙伴的科研单位有山西中医学院、福建医科大学附属第二医院、上海市第六人民医院、北京大学医学部、同济大学、四平中心医院、广州中医药大学、中科院上海生命科学研究院生化与细胞研究所、解放军第３０６医院、江南大学、西南医院、吉首大学、西南大学化学化工学院、宁波大学、福建医科大学附属医院、苏州市同济医院、中南大学、延安大学附属医院、中国科学院上海药物研究所、天津市儿童医院、江苏省中医药研究院、湘雅医学院、第四军医大学预防系劳动与环境教研室、扬州大学、上海交通大学、中国医科大学、浙江省立同德医院、中国人民解放军第１５０中心医院、苏州大学、四川大学华西医院、云南大学、扬州大学兽医学院、上海交通大学医学院附属第九人民医院、海南医学院、江苏肿瘤医院、上海市闵行区中心医院、大连医科大学附属医院、中国科学院广州生物医药与健康研究院、沈阳药科大学、广州市第八人民医院、南京大学、浙江中医药大学、兰州大学、上海中医药大学、中国农业科学院饲料研究所、厦门市妇幼保健院、大学、南京军区总医院、天津市人民医院、北京医学科学肿瘤医院、上海市同济医院、江苏大学、桂林医学院附属医院、中国科学院化学研究所

细胞传代方法：每周换液２-３次

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

NCI-H2066:人肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

细胞生长特性：悬浮生长

贴壁细胞传代：去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000rpm/min室温离心5min；弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶补足培养基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培养。悬浮细胞传代：一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min 室温离心5min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培养液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良HAO，当补液时，需避免反复吹打。

D10细胞类似产品：：HDLM2细胞、ACC-2细胞、AAV293细胞

MPASMC细胞类似产品：：Panc_03_27细胞、H-1672细胞、T-HSC细胞

HuH6细胞类似产品：：Mel526细胞、LC1细胞、Wistar Institute, Susan Hayflick细胞

Laboratory of Allergic Diseases 2细胞类似产品：：SU-DHL-1细胞、Hep 3B2_1-7细胞、GM-215细胞

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细胞

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IOSE29细胞类似产品：：C32r细胞、SCC7细胞、CORL26细胞

RFL-6细胞类似产品：：SNUC2B细胞、PG13细胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8细胞

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COLO 829细胞类似产品：：F81细胞、Swiss3T3细胞、SK-UT-1细胞

HT 1080细胞类似产品：：KG1A细胞、SKNBE(2)细胞、RMG-1细胞

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NCI-H2066:人肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

H2052细胞类似产品：：K-562细胞、P560细胞、L cells (TK-)细胞

BE2C细胞类似产品：：H.Ep.-2细胞、DLD1细胞、LA4细胞

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NeHepLxHT细胞类似产品：：SNU-C2A细胞、SLMT1细胞、SNU449细胞

OCI-Ly19细胞类似产品：：T84细胞、K-1735细胞、TNC-1B12B4细胞

ML-2细胞类似产品：：CAMA细胞、H2452细胞、NCIH508细胞

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FTC-133细胞类似产品：：SNU-C1细胞、SNU-251细胞、NSC34细胞

QBC-939细胞类似产品：：RC13细胞、TSUpr1细胞、P31/Fujioka细胞

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