KATO III:人胃癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

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细胞生长：贴壁

有一些细胞是数量多一点比较HAO生长，生长状态也比较HAO。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较HAO，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较HAO。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不HAO的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不HAO，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞建议只吹打，不消化）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得HAO的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

BPH-1细胞类似产品：：H711细胞、HEK;293细胞、Hs-746T细胞

CX1细胞类似产品：：RH7777细胞、SW 1417细胞、H-716细胞

SK.OV.3细胞类似产品：：HME1细胞、NUGC2细胞、Emory University-2细胞

H2227细胞类似产品：：ARPE19细胞、TW01细胞、COLO 741细胞

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞背景资料：详见相关文献介绍

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细胞形态：上皮细胞样

Panc 05.04细胞类似产品：：KMST6细胞、CMEC/D3细胞、NUGC-4细胞

OCI Ly3细胞类似产品：：Tokyo Medical and Dental university 8细胞、MDAMB436细胞、CESS细胞

hMSC-BM细胞类似产品：：YT细胞、FAO-1细胞、NCIH1755细胞

细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升GAO到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。

细胞传代方法：１：２传代。３天内可长满。

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长

细胞传代后放入培养箱没有摇匀，或者放入时摇匀，但在细胞贴壁前，又移动了培养瓶，频繁开关培养箱引起的振动或者培养瓶中培养液过少，培养箱搁板表面不平整，这些因素会导致细胞生长不均匀。研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。运输过程对细胞有严重影响。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C 太久。一些悬浮细胞抱团生长是正常现象，大部分悬浮细胞在细胞密度很GAO的情况下，很可能会出现部分细胞抱团生长的现象，聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物，殃及周围的悬浮细胞，因此在培养悬浮细胞时需控制HAO细胞密度。如果出现了细胞团，可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团，也可以尝试一下方法：将细胞悬液收集到15ml离心管中，静置20min左右，小心取上层细胞上清培养（该方法只能去除部分较大的细胞团）。部分细胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐药株等），这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡，则很可能是细胞状态不佳，可以通过调整血清浓度，控制消化，控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态；如果大部分细胞出现空泡，且单个细胞内空泡数目偏多，则可能细胞代次较GAO，细胞老化所致，需更换代次较早的细胞。

MV-4:11细胞类似产品：：SUM-159-PT细胞、FHs74 Int细胞、H-1755细胞

NKM-1细胞类似产品：：ZYM-SVEC01细胞、SCL-1细胞、Roswell Park Memorial Institute 1788细胞

IHHA-1细胞类似产品：：G402细胞、BEL 7405细胞、TE-32细胞

IEC6细胞类似产品：：HEK 293-EBNA细胞、COR-L23细胞、ME-180细胞

GM03573A细胞类似产品：：Panc 5.04细胞、NOMO1细胞、LLC-PK1细胞

HT 115细胞类似产品：：SBC5细胞、H2171细胞、KYSE520细胞

Metastatic Variant-522细胞类似产品：：NCI-H2291细胞、GH 3细胞、Granta 519细胞

U-343-MG细胞类似产品：：OUMS-27细胞、CMT 93细胞、H1568细胞

HCT.116细胞类似产品：：SO-Rb 50细胞、P3-X63-Ag8-653细胞、SHSY-5Y细胞

TU 686细胞类似产品：：NF639细胞、KOPN8细胞、N-Tera-2细胞

PA317细胞类似产品：：R 2 C细胞、Panc04.03细胞、H3396细胞

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LTPA细胞类似产品：：NCIH244细胞、HT-55细胞、NCIH1299细胞

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HS-729细胞类似产品：：Murine Long bone Osteocyte-Y4细胞、SKNMC细胞、RPMI 6666细胞

HECV细胞类似产品：：CCD 19Lu细胞、NCTC 3960细胞、PANC-28细胞

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Jurkat clone A3细胞类似产品：：LL/2 (LLC1)细胞、RTMC细胞、RIN m5F细胞

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NCI-H1792细胞类似产品：：MA 104细胞、COLO 678细胞、A-375SM细胞

Lieming Xu-2细胞类似产品：：HSC细胞、H810细胞、U251n细胞

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BNL-HCC细胞类似产品：：Walker 256细胞、Vero细胞、QGY细胞

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HL 60细胞类似产品：：SW 948细胞、B-104细胞、RERFLCMS细胞

CAL62细胞类似产品：：H-2405细胞、NCI-H-82细胞、AgC11x3A细胞

UMUC-3细胞类似产品：：P388D1细胞、Psi-2 DAP细胞、MOLT 16细胞

SN4741细胞类似产品：：Tb1.Lu细胞、Tn-5细胞、Fetal Human Lens-124细胞

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B 95.8细胞类似产品：：NS20Y细胞、KBM5细胞、HFE-145细胞

SK-CO-1细胞类似产品：：H-1734细胞、NCI-H1437细胞、CV 1细胞

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BT 325细胞类似产品：：BCaP-37细胞、KNS-62细胞、DU-4475细胞

MFE280细胞类似产品：：EBC1细胞、MG-63细胞、BaF3细胞

GBC-SD细胞类似产品：：Alexander细胞、Hx-147细胞、PL5细胞

Panc02细胞类似产品：：P815细胞、KTA-7细胞、CHOS细胞

COLO-738细胞类似产品：：Roswell Park Memorial Institute 1846细胞、M3 Clone M-3细胞、GM05862细胞

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