HCE-2 [50.B1]:人角膜上皮复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

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细胞生长：贴壁

可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态HAO与不HAO至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺HAO的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更HAO一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

Vero-E6细胞类似产品：：LS-513细胞、KMH-2细胞、PSN1细胞

LCLC103H细胞类似产品：：CHO-S细胞、OAC-P4C细胞、MDA-MB-134细胞

SUM-52细胞类似产品：：AG 9细胞、B16/F0细胞、HCC 2185细胞

KYSE-270细胞类似产品：：MCA 38细胞、NCI-H2108细胞、GM02132C细胞

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞背景资料：角膜上皮；Ad１２-SV４０；男性

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细胞形态：上皮细胞样

IFRS1细胞类似产品：：SNU-423细胞、GM06141细胞、TE13细胞

HS578细胞类似产品：：CAMA-1细胞、SCCVII/St细胞、MT-3 [Human leukocytes]细胞

HeLa-229细胞类似产品：：HEK 293T/17细胞、HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]细胞、SP2/0 Ag-14细胞

细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升GAO到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

细胞传代后放入培养箱没有摇匀，或者放入时摇匀，但在细胞贴壁前，又移动了培养瓶，频繁开关培养箱引起的振动或者培养瓶中培养液过少，培养箱搁板表面不平整，这些因素会导致细胞生长不均匀。研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。运输过程对细胞有严重影响。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C 太久。一些悬浮细胞抱团生长是正常现象，大部分悬浮细胞在细胞密度很GAO的情况下，很可能会出现部分细胞抱团生长的现象，聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物，殃及周围的悬浮细胞，因此在培养悬浮细胞时需控制HAO细胞密度。如果出现了细胞团，可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团，也可以尝试一下方法：将细胞悬液收集到15ml离心管中，静置20min左右，小心取上层细胞上清培养（该方法只能去除部分较大的细胞团）。部分细胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐药株等），这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡，则很可能是细胞状态不佳，可以通过调整血清浓度，控制消化，控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态；如果大部分细胞出现空泡，且单个细胞内空泡数目偏多，则可能细胞代次较GAO，细胞老化所致，需更换代次较早的细胞。

H1694细胞类似产品：：beta TC6细胞、TE671细胞、CCRF/CEM/0细胞

RS(4;11)细胞类似产品：：Stanford University Pediatric T-cell line 1细胞、MUTZ1细胞、THLE2细胞

MSF细胞类似产品：：H2227细胞、U87-MG细胞、Panc 10.05细胞

B78细胞类似产品：：RPMI6666细胞、SW-1783细胞、ASH3细胞

HEK 293 c18细胞类似产品：：HBEpiC细胞、OVCAR 420细胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2细胞

C4-2细胞类似产品：：BC-024细胞、NCI-H1693细胞、MDAMB453细胞

TF1细胞类似产品：：NB1-RGB细胞、SHEP1细胞、BetaTC6细胞

FO [Mouse myeloma]细胞类似产品：：P31/Fujioka细胞、Colo16细胞、MHH-CALL-2细胞

HIC细胞类似产品：：hA549细胞、GP2d细胞、SF 763细胞

ECV304细胞类似产品：：H82细胞、3T3L1细胞、GOS-3细胞

NCI-H596细胞类似产品：：MDCK supertube细胞、Vero C1008细胞、Los Angeles Prostate Cancer-4细胞

SW1353细胞类似产品：：GP293细胞、L5178Y细胞、CAL-51细胞

Hs895T细胞类似产品：：Roswell Park Memorial Institute 7951细胞、SK-N-AS细胞、MOLP2细胞

PNT1A细胞类似产品：：RPE-1细胞、HCCLM6细胞、HLEC-SRA 01/04细胞

BIC-1细胞类似产品：：BALB/c 3T3 clone A31细胞、SW-756细胞、ONS76细胞

NK-92细胞类似产品：：WPMY1细胞、CAL-62细胞、MDA-MB-361细胞

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CORL23细胞类似产品：：DoTc2细胞、Madin Darby Bovine Kidney细胞、RF/6A细胞

OSRC2细胞类似产品：：GL261细胞、Hep 3B2.1-7细胞、CA-OV-3细胞

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PF-382细胞类似产品：：HuT-102细胞、Hs888 Lu细胞、SNU-398细胞

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NK-92MI细胞类似产品：：SLMT1细胞、SUPB-15细胞、NCI-SNU-407细胞

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130 T细胞类似产品：：H2106细胞、3396细胞、MDAMB231细胞

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NCI-H2347细胞类似产品：：KATO III细胞、32D/cl3细胞、KAT-5细胞

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A-431细胞类似产品：：RL95-2细胞、Raji细胞、SKBR-3细胞

Hs-606-T细胞类似产品：：SKES1细胞、NCIH1838细胞、LP-1细胞

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H1688细胞类似产品：：T/G HA VSMC细胞、KLM1细胞、HEL-299细胞

RPMI no 8226细胞类似产品：：NCIH82细胞、KYSE-450细胞、ARH77细胞

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FCCH1018细胞类似产品：：VP 229细胞、210RCY3-Ag1.2.3细胞、EFM-192C细胞

NE1细胞类似产品：：LS 180细胞、OV-2008细胞、MEC-1细胞

MV-1-Lu细胞类似产品：：BIU-87/Adr细胞、NOZC-1细胞、T 98 G细胞

SKml2细胞类似产品：：P3/X63-Ag8细胞、C-32细胞、MOLM16细胞

HT-1197细胞类似产品：：766T细胞、GA-10 (Clone 4)细胞、HCT-8/V细胞

ANA1细胞类似产品：：C-127细胞、KBM7细胞、H-2081细胞

SCL-1细胞类似产品：：MDA-MB-175-VII细胞、SO-RB50细胞、NCI-H1581细胞

WPE-int细胞类似产品：：HCC-2108细胞、DMS-53细胞、BIC细胞

JC细胞类似产品：：NCI H157细胞、THEECs细胞、MDCKII-WT细胞

Normal Rat Kidney-52E细胞类似产品：：U-138-MG细胞、MDA-MB157细胞、Wayne State University-Head and Neck 13细胞

FU-OV-1细胞类似产品：：NCIH526细胞、MDA-MB-231-GFP细胞、U-CH1细胞

DK-MG细胞类似产品：：CAL-12T细胞、NRCC细胞、OCI-LY-18细胞

A375细胞类似产品：：LOUNH91细胞、NTC-200细胞、Lewis Lung Cancer细胞

SKRC20细胞类似产品：：C32 mel细胞、SV40-HCEC细胞、CCD-112CoN细胞

RH7777细胞类似产品：：KALS-1细胞、HCC-827细胞、NCI-128细胞

NCIH2452细胞类似产品：：B-3细胞、NMCG1细胞、HPMEC细胞

UACC 812细胞类似产品：：RL-952细胞、VMM5细胞、Tu212细胞

HCE-2 [50.B1]:人角膜上皮复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

SK-ChA-1细胞类似产品：：CHL细胞、PC-3细胞、TOV-112D细胞

PANC 327细胞类似产品：：HepG2/C3A细胞、PC-3M IE8细胞、2E8细胞

CLL-CII细胞类似产品：：SW13细胞、H-441细胞、D341Med细胞

M-14细胞类似产品：：SW626细胞、NIH 3T6细胞、BNL-CL.2细胞

HCe-8693细胞类似产品：：MOLM-16细胞、UACC893细胞、OCIAML5细胞

SK-RC-42细胞类似产品：：LoMeT-ccRcc细胞、U87细胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-6细胞

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