细胞核提取试剂盒
一、产品简介。
细胞核是细胞内的细胞器,也是遗传物质分布的重要场所,分离细胞核,可用于转录调控相关的生物学实验。本产品利用蔗糖密度梯度离心法,能够快速且完整的分离细胞核。
二、运输与存储条件。
本产品常温运输,4 ℃保存,有效期 12 个月。
三、特点与优势。
1. 本产品操作简单,可以快速分离细胞核。
2. 本产品分离的细胞核完整,纯度高。
四、自备试剂与耗材。
PBS、RIPA 裂解液(不含 SDS)、1.5 ml 离心管、震荡混匀仪(Vortex mixer)、冷冻离心机。
五、使用说明。
1. 细胞处理。胰酶消化法收集贴壁生长细胞,或离心法直接收集悬浮培养细胞,每个样品中细胞数量为 2×107,加入 1 ml Buffer NA,震荡(Vortex),重悬细胞。
2. 细胞裂解。将细胞重悬液转入匀浆器,匀浆 50-100 次,至显微镜下观察到 80%以上细胞都破碎为止。
3. 离心。将细胞匀浆液转移至 1.5 ml 离心管,600×g,4 ℃离心 10 min,上清转移至新的 1.5 ml离心管,即为细胞浆(可保存在-80 ℃),沉淀为粗细胞核。
4. 粗细胞核中加入 1 ml Buffer NA 重悬,600×g,4 ℃离心 10 min,弃上清。
5. 细胞核纯化。向细胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NB,震荡(vortex)重悬,16,000×g,4 ℃离心15-30 min,弃上清。
6. 细胞核洗涤。向细胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NA,震荡(vortex)重悬,600×g,4 ℃离心 10 min,弃上清,沉淀即为纯化细胞核。
7. 细胞核可暂时存放在-80 ℃冰箱中,也可立即裂解,抽提核蛋白。
8. 细胞核裂解。主要包括以下二种方式。
1) 变性裂解液裂解。利用本公司的细胞裂解液(Laemmli Buffer,2×)重悬细胞核沉淀,裂解细胞核,提取细胞核蛋白,用于 western blot 分析。但提取蛋白已经变性,不可用于酶活性测定。
2) RIPA 裂解液裂解。利用温和的 RIPA 裂解液(不含 SDS)重悬细胞核沉淀,裂解细胞核,提取蛋白,用于酶活性测定及 western blot 等实验。
六、注意事项
1. 整个操作过程需在低温条件下进行,所用试剂提前预冷。
2. 为了减少其它细胞器污染,提取的细胞浆溶液可以12,000×g,4 ℃离心15 min,弃沉淀,上清即为纯化后的细胞浆,转移至新的离心管,冻存。
3. 为了抑制蛋白降解,实验过程中可添加蛋白酶抑制剂(如cocktail等)。
关键字: 细胞核提取试剂盒;高纯细胞核分离;
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