![首图带联.jpg 首图带联.jpg](/SupplyImg/2021-07-07/6376126538781873873254475.jpg)
一、细胞基本属性
细胞名称:小鼠B细胞淋巴瘤细胞
细胞别称:A20
细胞货号:SNL-153
细胞种属:小鼠
生长情况:半贴壁
培养条件:1640+10%FBS+1%双抗
培养环境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、细胞培养操作
换液周期:2-3天
培养基体积:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
传代比例:1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定)
传代方法:
1.轻轻吸走培养上清,留2-3ml培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞;
2.混匀细胞,收集细胞培养基,900rpm离心3-5min,弃上清;
3.加新的完全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里;
补足完全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养;
注意事项:半贴壁细胞会附着瓶底,但贴壁不紧,轻轻吸取培养基轻轻吹打细胞面就会脱落,不需要胰酶消化。建议使用培养皿培养,更适合吹打细胞操作,吹打细胞注意尽量轻柔,不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
三、细胞冻存操作
冻存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);
冻存规格:200-300万/ml,1ml每管
冻存方法:
1.离心获得细胞沉淀后,加配置好的冻存液轻轻重悬细胞;
2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管;
将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存
注意事项:冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案
Tips:
1.细胞半贴壁圆形生长,部分悬浮圆形,传代时均可收集培养,换液时将悬浮细胞离心收集后重新接回原瓶,若贴壁细胞较多活性较好时可以不要悬浮的细胞;
2.传代有部分细胞碎片可以换液后用PBS润洗细胞清除,使用的PBS需要恢复到室温,加入时不要冲到细胞面,润洗尽量轻柔;
3.该细胞生长较快,培养基消耗较快,培养时注意密切关注细胞状态,密度较高、培养基有变黄趋势时及时换液避免细胞状态变差;
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