反转录(Reverse Transcription)是以RNA为模板,在反转录酶的催化作用下,合成RNA/DNA杂合双链,然后水解杂合双链中的RNA,得到互补的单链cDNA的过程。得到的cDNA单链可以作为扩增模板合成双链DNA。cDNA的合成可以用与后续的PCR实验、qPCR实验、基因检测、基因工程等各个领域。其中反转录酶的选择对后续实验至关重要,经过改造和优化,推出了特别适合后续qPCR实验的高精确度Q M-MLV反转录酶。 Q M-MLV反转录酶具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性,能够以RNA或DNA为模板,在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成,即可以进行cDNA的链合成。同时本反转录酶还保留了RNase H活性,能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA,有利于后续cDNA第二链的合成。采用本反转录酶,生产了 Q cDNA链合成试剂盒,试剂盒包含了进行cDNA链合成所需的各种试剂,使用简单方便快捷。
产品特点:检测灵敏度高:和其它反转录酶相比,本产品的反转录产物用于qPCR时,CT值通常能下降1-2左右,使用本产品能获得更好的检测灵敏度,可以使用更少的样品;扩增速度快:使用本产品时,仅需反转录5-10分钟,即可以用于后续的qPCR,可以大幅缩短实验时间。反转录性能优,扩增特异性强,反应稳定性好
产品用途:1. 总RNA或mRNA后cDNA条链的合成,特别适合用于常规RNA样品的反转录和qPCR检测或一步法qRT-PCR检测,也非常适合于內源低丰度RNA、外源病毒RNA等微量RNA的反转录及后续的qPCR检测;2. 反转录产物也适合用于常规PCR、cDNA的第二链合成、cDNA文库构建、克隆;3. DNA探针的荧光、生物素、地高辛或同位素标记;4. 通过引物延伸(primer extension)分析和研究RNA。
产品效果:
图2.使用 Q cDNA链合成试剂盒对总RNA反转录后,对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见本产品可以轻松完成长度为8 kb以下基因的反转录,反转录的长度可以达到12 kb。图中的扩增效果仅供参考。
小编贴心为大家整理了不同反转录酶的特点,大家可根据实验需求进行选择哦~
选择指南:1. 如果反转录后的用途是qPCR,先推荐选购Q M-MLV反转录酶。对于待检测的目的RNA的丰度比较高的时候,可以适当优先考虑II M-MLV反转录酶(RNase H-),通常仅需反转录10分钟即可用于qPCR,也可以大幅缩短实验时间。2. 如果希望克隆一个目的基因,先推荐III M-MLV反转录酶(RNase H-),该酶不仅能反转录长达12kb的RNA,并且具有快速反转录能力,小于3kb的目的基因仅需反转录10分钟,可以大幅缩短实验时间。用于克隆目的基因时,II M-MLV反转录酶(RNase H-)、M-MuLV反转录酶和 M-MuLV反转录酶(RNase H-)也是比较好的选择。
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