果胶酯酶(pectinesterase,PE)试剂盒说明书
(NaOH滴定法) 50管/48样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
果胶酯酶(pectinesterase,PE)试剂盒测定意义:
果胶酯酶属果胶酶系,亦称为果胶酶、果胶甲酯酶、果胶氧化酶。催化水解果胶长链上的甲氧酯水解产生小分子物质果胶酸和甲醇, 从而增加果胶在水中的溶解度。广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌中,起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用,在食品工业中具有及其重要的作用和开发前景。
测定原理:
果胶酯酶催化水解果胶分子释放H+,使反应体系的pH下降,用碱液维持体系的pH始终保持在7.8(酚酞指示剂维持在粉红色),通过碱消耗的NaOH量反映果胶酯酶的活性。
需自备的仪器和用品:
天平、研钵、离心机、烘箱。
试剂的组成和配制:
提取液:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前每瓶加双蒸水100mL充分溶解。
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加少量蒸馏水溶解,然后转入500mL容量瓶,用蒸馏水定容至500mL。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。易挥发,使用后及时用封口膜封口。
试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:用蒸馏水将试剂三稀释5倍,得试剂四。
样品处理 :
称取1g组织样品,加入2mL提取液冰浴充分研磨(研钵提前-20℃预冷10min,提取液提前4℃预冷。可以根据客户自己的样本特殊性,自行按比例调整),12000g、4℃离心15min,取全部上清液待测。
果胶酯酶(pectinesterase,PE)试剂盒测定操作:
1. 试剂一于37℃烘箱保温10min,样本全部提取上清(约2mL)分别转移至15 mL离心管或者试管中。
2. 向样本上清中分别加入50μL试剂二,混匀。然后每管加入8 mL试剂一混匀,并用试剂四调节pH至7.8(粉红色)。
3. 将上述各离心管或试管放置37℃烘箱60分钟。每隔20分钟用试剂四调节pH,使pH维持在7.8(粉红色)。记录所消耗的试剂四的体积V(mL)。
计算公式:
酶活定义:每g组织每分钟消耗1μmol NaOH定义为一个酶活单位U。
PE活性(U/g)= 20VF/(TW)= VF/(3W)
V:滴定所消耗的试剂四的量,mL;T:反应时间,60 min;F:样品稀释倍数;W:样品质量,g
注意事项:
1. 试剂一提前预热,保证酶反应速率。
2. 实验前先做预实验,如果酶活力太高,适当调整样本稀释倍数,如将样品稀释2-5倍进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
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