锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。
锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒测定原理:
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制 :
试剂一:液体75mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体11mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:
1. 组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体:直接检测。
锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)试剂盒测定操作:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至465nm,蒸馏水调零。
2、 测定前将试剂一、二、三、四在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上。
3、 样本测定表
试剂名称(µL) | 测定管 |
样本 | 100 |
试剂一 | 500 |
试剂二 | 100 |
试剂三 | 200 |
试剂四 | 100 |
在1 mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂,立即混匀并计时,记录465nm下30s时的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。
注意:若一次性测定样本较多,可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)放置10min以上,测定时加入100µL样本和900µL混合液测定。
酶活计算公式:
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/mg prot)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/g 鲜重)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×W÷V样总)÷T= 413×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义:每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109] ÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
= 413×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义:每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性(nmol/min/mL)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T= 413×ΔA
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1×10-3L;V样:反应中样本体积,0.1mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,2min
关键字: 锰过氧化物酶(Manganese per;锰过氧化物酶(Manganese per;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。
公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持,物流售后服务等多部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户,雅吉生物的试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员好评,先后在权威杂志文章中被引用。
本公司郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到。