β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)试剂盒测定意义:
β-GD广泛存在于动物组织中,是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶,具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。该酶在肝细胞中含量较高。此外在胃癌组织中含量丰富,测定胃液β-GD活性对于研究胃癌具有重要的意义。
测定原理:
β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞,通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入5mL蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体37.5mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:1μmol/mL标准储备液10mL,4℃保存;
样品测定的前处理:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)试剂盒测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在EP管中加入下列试剂)
试剂名称(μL) | 加样孔 |
测定管 | 标准管 | 空白管 |
试剂一 | 100 | 100 | 100 |
试剂二 | 100 | 100 | 100 |
样本 | 50 |
|
|
1μmol/mL标准液 |
| 50 |
|
蒸馏水 |
|
| 50 |
混匀后,37℃水浴30min
混匀, 540nm下测定各管吸光值
注意:标准管和空白管只需测一次。
β-GD活性计算:
(1)按样本鲜重计算:
单位定义:每小时每g鲜重样品中催化产生 1μmol酚酞的量为一个活力单位。
β-GD(μmol/h/g 鲜重)= (C标准管×V1)×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=2×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每小时每mg组织蛋白催化产生 1μmol酚酞的量为一个活力单位。
β-GD(μmol/h /mg prot)= (C标准管×V1)×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=2×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
C标准管:标准管浓度, 1μmol/mL;V1:加入样本体积:0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,0.5h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
关键字: β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuron;β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuron;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。
公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持,物流售后服务等多部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户,雅吉生物的试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员好评,先后在权威杂志文章中被引用。
本公司郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到。