山梨醇含量试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
山梨醇含量试剂盒测定意义：
山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是糖运输形式之一，而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此，在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含量变化。
测定原理：
山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物，在655nm波长有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体10mL×1瓶 ，4℃保存。
山梨醇的提取：
按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.2g组织，加入2mL蒸馏水），研磨成匀浆， 95℃水浴10分钟（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心10min，取上清液待测。
山梨醇含量试剂盒测定步骤：
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至655nm，蒸馏水调零。
2、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：
试剂（μL） | 空白管 | 测定管 |
试剂一 | 150 | 150 |
试剂二 | 140 | 140 |
样本 |
| 1000 |
蒸馏水 | 1000 |
|
混匀后室温静置15min，8000g，25℃离心10min，取上清液测655nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。
山梨醇含量计算：
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.352x - 0.002；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、按照样本质量计算
山梨醇含量（mg /g 鲜重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W
3、按照样本蛋白浓度计算
山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr
V1：加入样本体积，1mL；V2：加入提取液体积，2 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，
g
注意：
最低检测限为1μg/g鲜重或0.01μg /mg prot
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