脂肪酶(Lipase,LPS)活性试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
脂肪酶(Lipase,LPS)活性试剂盒测定意义:
LPS又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。
测定原理:
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。
自备仪器和用品:
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯100mL、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体90mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体14mL×1瓶,4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡20min。
试剂三:甲苯100mL×1瓶,4℃保存(自备)。
试剂四:液体20mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体10μL×1瓶,10 µmol/mL的标准溶液,4℃保存。临用前加入3.168 mL甲苯,充分溶解。
脂肪酶(Lipase,LPS)活性试剂盒粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后12000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体: 直接检测。
LPS测定操作:
1. 分光光度计预热30 min以上,调节波长到710 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。
2. 在5mL EP管中依次加入下列试剂
试剂名称(μL) | 空白管 | 测定管 |
蒸馏水 | 375 |
|
样本 |
| 125 |
试剂一 | 750 | 750 |
试剂二 |
| 250 |
37℃振荡反应10 min
37℃振荡反应10 min后,8000g,25℃,离心10min,取上清液
试剂名称(μL) | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
上清液 | 1200 | 1200 |
|
标准品 |
|
| 1200 |
试剂四 | 300 | 300 | 300 |
37℃振荡反应5 min后,静置5min,取800μL上层液加入1 mL玻璃比色皿,于710nm处测定吸光值。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
LPS活性计算公式:
1. 组织、细菌或细胞LPS活性
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V反总÷(Cpr×V样)÷T
=16×[(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol/min/g 鲜重) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T
=16×[(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]÷W
(3)按照细菌或者细胞数量计算
活性单位定义:37℃中每104个细胞每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=16×[(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]÷细胞数量
2. 血清等液体LPS活性
活性单位定义:37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol /min/mL) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V反总÷V样÷T
=16×[(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]
C标准品:10 µmol/mL;V反总:反应总体积,2mL;V样:反应中加入样本体积,0.125mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;W:样本质量,g;T:催化反应时间,10 min。
关键字: 脂肪酶(Lipase,LPS)活性试剂盒;脂肪酶(Lipase,LPS)活性试剂盒;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。
公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持,物流售后服务等多部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户,雅吉生物的试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员好评,先后在权威杂志文章中被引用。
本公司郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到。