可溶性酸性转化酶(Soluble acid invertase, S-AI)试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
可溶性酸性转化酶(Soluble acid invertase, S-AI)试剂盒测定意义:
蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。
AI的最适pH为3~5。AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI(B-AI)两种类型。S-AI主要存在于细胞液泡或自由空间中,最适 pH 为4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。
测定原理:
S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与S-AI活性成正比。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入25mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体30mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
可溶性酸性转化酶(Soluble acid invertase, S-AI)试剂盒测定步骤和加样表:
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 200 | 200 |
试剂一 |
| 800 |
试剂二 | 800 |
|
混匀, 37℃准确水浴30min后,95℃水浴10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)
混匀,95℃水浴10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀, 510nm处,蒸馏水调零,记录各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A测定-A对照。
S-AI活性计算:
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
(1)按蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鲜重计算:
单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI活性(μg/min/g鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.2mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
关键字: 可溶性酸性转化酶(Soluble aci;可溶性酸性转化酶(Soluble aci;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。
公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持,物流售后服务等多部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户,雅吉生物的试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员好评,先后在权威杂志文章中被引用。
本公司郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到。