蔗糖(sucrose)含量试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
蔗糖(sucrose)含量试剂盒测定意义:
蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。
测定原理:
先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在480nm下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100ml×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体3ml×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体 40ml×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体 15ml×1瓶,4℃避光保存;
试剂五:粉剂0.5g×1瓶,常温保存。
蔗糖提取:
称取0.1~0.2g样本,常温研碎,加入1mL提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于80℃水浴锅中10min,振荡3~5次,冷却后,4000g,25℃离心10min,取上清,加入2mg试剂五,80℃脱色30min,再加入1mL提取液,4000g,25℃离心10min,取上清液测定。
测定操作表(在1.5mL EP管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
样本 |
|
| 100 |
试剂一 |
| 100 |
|
蒸馏水 | 100 |
|
|
试剂二 | 50 | 50 | 50 |
混匀,沸水浴煮沸5min左右(盖紧,防止水分散失)
混匀,沸水浴30min,冷却后480nm处蒸馏水调零,空白管、标准管和测定管分别记为A1、A2和A3。
蔗糖(sucrose)含量试剂盒蔗糖含量计算:
1、按照蛋白质含量计算
蔗糖含量(mg/mg prot)=(C标准管×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行测定蛋白浓度。
2、按照样品质量计算
蔗糖含量(mg/g鲜重)=(C标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=2×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。
C标准管:标准管浓度,1mg/mL;V1:加入样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,2mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:最低检测限为100ng/g鲜重或1ng/mg prot
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