1.售前须知:
1. 细胞贴壁慢特别是刚复苏时,一般两到三天贴壁展开,会有空泡; 2. 细胞在传代细胞中注意消散,不然难贴壁; 3. 成团生长,细胞密度越大,表面空泡黑点越多;4. 一般细胞长至80%传代,细胞成片,其实密度很大; 5. 细胞生长太满对细胞状态影响严重,传代后易碎,死亡; 6. 细胞生长时间越久,消化难度也会随之增加;消化到轻拍培养瓶侧边细胞可以滑落的时候可以终止。
2.细胞起源:
细胞简称 Caco-2
细胞别称 CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2;Caco-2/ATCC细胞背景描述 Caco-2细胞分离自直肠原位癌;当长到满时,Caco-2细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸
结合蛋白Ⅱ,并呈角质蛋白阳性。
供体年龄 男;72岁
组织来源 结肠,结直肠腺癌
细胞形态 上皮细胞样
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 肠癌细胞
生长特性 贴壁细胞
生物安全等级 1
3.培养及保藏:
完全培养基 MEM(含NEAA)(PM150410)+20% FBS(164210-50)+1%P/S(PB180120)
培养环境 空气,95%;CO 2,5%
37℃
冻存条件 55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
液氮
4.传代方法:
传代步骤 1、吸出原培养液;
2、加入2ml左右PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;
4、放入培养箱消化,显微镜下看到细胞块中间的细胞明显变圆有间隙时可终止,全程不要拍打培养瓶;
5、加入3ml含血清的培养基终止消化,吹打细胞使之脱壁并在液体里反复吹打使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液;
6、收集细胞悬液离心,1200rpm/min 3分钟,离心完吸出上清丢弃;
7、加入新鲜培养基,吹打几下混匀细胞即可,按比例接种到新培养瓶,补足培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。
消化时间 3~5分钟
传代比例(密度) 1:3-1:4
换液频次 2~3次/周
倍增时间 ~60-80 hours