英文名称:Cyanine3.5 amine
Cyanine3.5-NH2
中文名称:Cy3.5 氨基
分子式:C44H56Cl2N4O
分子量:727.85
外观:固体或粉末
纯度:>95%
ex/em : 591/604 nm (PBS缓冲液)
消光系数(ε) : 116000 L⋅mol−1⋅cm−1
量子产率(Φ) : 0.35
溶解性 :可溶于氯仿,甲醇,乙腈,DMF等有机溶剂,难溶于水
保存条件 :避光,干燥,-20oC保存
结构式:
![](/SupplyImg/2022-11-02/6380300360059461267513435.jpg)
Cy3.5 (Cyanine 3.5) 是一种发红色荧光的花青素类荧光染料。Cy3.5在显影时可以用561nm或者594nm的激光束激发然后用 Texas Red® 相似的滤片观察,它是一种非常常用的标记染料。Cy3.5-NHS可以用来标记蛋白,抗体,多肽,核酸分子,纳米粒等。
胺基(primary amine)是生物标记反应中常用的基团。蛋白表面赖氨酸侧链(residue)官能团就是伯氨基,伯胺基可以和NHS活化酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯,N-hydroxysuccinimide ester,succinimidyl ester),异氰酸酯(isothiocyanate, ITC)或其它活化基团反应生成稳定链接,从而把Cy3.5分子连接到目标分子上。
Cy3.5-伯胺的水溶性较低,所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感,可选择磺化花青素(sulfonated cyanine),即磺化-Cy3.5-伯胺( D10031 )。两者的光谱性质几乎一致,因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于:磺化染料是水溶性的,在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂,并且降低染料在水中聚集的可能性,增强标记效率。
Cy3.5-伯胺标记后的产物Ex/Em是591nm/604nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Texas Red®,Alexa Fluor 594, BODIPY® TR, DyLight 594等。
注意事项
Cy3.5-伯胺水溶性较低,标记反应可在有机溶剂中进行或者含有机助溶剂的水相中进行。
标记时使用不含氨基的缓冲体系,比如磷酸钠缓冲液(PBS),Hepes缓冲液,碳酸氢钠缓冲液;或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液,比如Tris,甘氨酸等,它们会和Cy3.5上的伯胺竞争。高浓度咪唑(imidazole)也会影响反应。
标记反应不要放在强光下,因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂泊(photobleaching)。
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