氮自由基(DPPH)清除能力测试试剂盒
(A001-96T 分光光度计法)
一.测定原理
DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基,有一个单电子,在517nm下有强吸收,如果有其他物质提供一个电子使此单电子配对,其吸收会消失褪色,褪色程度与接受电子的量呈正比。即反应物清除氮自由基的能力与试剂在517nm的吸光值成反比。
二.试剂组成
试剂一:DPPH试剂1mL×1瓶
试剂二:100μg/mL 维生素C标准溶液 20mL×1瓶
三.储存条件及有效期
试剂盒-20℃可保存6个月。
四.试剂的配制
试剂一:37℃平衡20min以上,待试剂融化后,在试剂瓶中加入100ml 95%乙醇或无水乙醇,剧烈震荡使试剂充分溶解。
注意:溶解一定要充分,如有条件可采用超声波助溶。
试剂二应用液:根据是否需要制作阳性对照标准曲线有两种配制方法。
1. 如仅需要将维生素C作为质控品,可取100μL 试剂二,加入900μL样品稀释液,充分混匀;
2. 如需测定维生素C的IC50,可分别移取0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,4.0,5.0mL 试剂二于空离心管中,再依次加入10.0,9.5,9.0,8.5,8,7.5,7.0,6.0,5.0ml样品稀释液,充分混匀。配制成0,5,10,15,20,25,30,40,50 μg/mL 维生素C样品。
五.操作步骤
| 空白孔1 | 测定孔 | 对照孔2 | 质控孔 |
试剂一(mL) | 1 | 1 | 0 | 1 |
样品溶液(mL) |
| 1 | 1 |
|
试剂二应用液(mL) |
|
|
| 1 |
样品稀释液(mL) | 1 |
|
|
|
充分混匀,室温避光静置30min使之充分反应。选用0.5mm比色皿3,517nm处测定吸光值。
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