一般描述
SPDP 试剂的胺反应部分是 N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯。反应最通常在 pH 7-8 的磷酸盐、碳酸盐/碳酸氢盐或硼酸盐缓冲液中进行。可以使用其他不包含伯胺(或硫醇或二硫化物还原剂–参见巯基反应性的讨论)的缓冲剂。pH 值越高,反应和水解降解的速率越大;例如,NHS 酯的半衰期在 pH 值为 7 时为数小时,而在 pH 值为 9 时不到 10 分钟。SPDP 和 LC-SPDP 等 NHS 酯试剂的水溶性有限,在将其添加到反应混合物之前,必须先将其溶于有机溶剂中。诸如 Sulfo-LC-SPDP 的 Sulfo-NHS-酯试剂是水溶性的,可以直接添加到水性反应混合物中。
特点和优势
反应性基团:NHS 酯和吡啶基二硫醇对以下分子具有反应性:氨基和巯基与游离巯基反应时释放出可检测的副产物;通过测量 343 nm 处吡啶-2-硫酮的释放,可以轻松地跟踪反应进度间隔臂中的二硫键在pH 8.5条件下易于被10-50mM DTT或TCEP裂解减少 SDS-PAGE 上样缓冲液,也易于使间隔臂裂解使用可裂解交联剂,能够实现交联产物的分离水不溶性(先溶于 DMF 或 DMSO)SPDP 交联剂可透过膜,因此可以在细胞内部进行交联与其他品种的 SPDP 型试剂进行比较,包括聚乙二醇化形式
注意
这种产品对湿气很敏感。小瓶包装在带有干燥剂的可再密封袋中,以减少湿气接触。冷藏后,打开前将小瓶平衡至室温,以减少小瓶内的冷凝。制备新的溶液。不建议储存原液。使用后,将小瓶放回可重新密封的袋子中。封闭袋子,在推荐的温度下储存产品。
Sigma-Aldrich西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司
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