参数规格:
产品名称:同猪生殖与呼吸综合症病毒欧洲株PCR检测试剂盒
型号 : EY00P672
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
SW-13(肾上腺皮质癌细胞) 5×106cells/瓶×2 MCF-7(癌细胞)曙红Y,醇溶剂红 43质量规格:AREosin Y ,alcohol solution
CM-M068小鼠肾小管平滑肌细胞完全培养基100mL曙红B质量规格:BSEosin B
CD27 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD27 / TNFRSF7 细胞裂解液 (阳性对照) 芦丁/芸香叶苷质量规格:>97%,BRRutin
小气道上皮细胞培养基SAEpiCM-prf芦丁/芸香叶苷(标准品)质量规格:≥98%,标准品Rutin
Hela P10s-11F细胞,细胞 小鼠神经母细胞瘤细胞与大鼠胶质瘤细胞之融合细胞,NG108-15细胞 支气管平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)新橙皮苷二氢查尔酮质量规格:≥95%,BRNeosperidin dihydrochalcone
同猪生殖与呼吸综合症病毒欧洲株PCR检测试剂盒二去甲基佐米曲坦质量规格:美国进口Didesmethyl Zolmitriptan 人催产素(OT)ELISA检测试剂盒Humanoxytocin,OTELISAKit 96T/48T Humanierferon-inducibleprotein10,IP-10ELISA试剂盒人干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒规格:96T/48T
N-去甲基佐米曲坦质量规格:美国进口N-Desmethyl Zolmitriptan 大鼠肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)试剂盒 Rat Pulmonary Surfacta-associated protein D,SP-D ELISA kit Humanmonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAKit人单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒规格:96T/48T
佐米曲坦 N氧化物质量规格:美国进口Zolmitriptan N-Oxide CLIAKitforUPP1(Humanuridinephosphorylase1)ELISAKit人尿嘧啶核苷1酸化酶1规格:48T/96T 大鼠微纤丝相关糖蛋白3(MFAP3)ELISA试剂盒 ,英文名: MFAP3 ELISA Kit
雌莫司汀质量规格:美国进口Estramustine 拟南芥种子甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒5 人抗肝肾微粒体抗体(LKM)ELISA检测试剂盒Humanlivedneymicrosomeaoaibody,LKMELISAKit 96T/48T
偶氮胂Ⅰ水合物(90%)Arsenazo I Hydrate质量规格:0.9 人结核菌杆(TB)抗体(IgA)试剂盒 Human tuberculosis(TB)aibody(IgA)ELISA kit 人糖化血红蛋白A1c(A1c)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
无水硫酸钠(SP) sulfate anhydrous质量规格:SP Ratai-IgEreceptoraibodyELISAKit大鼠抗IgE受体抗体ELISA试剂盒规格:96T/48T 猪β干扰素(IFN-β/IFNB)试剂盒 Pig Ierferon β,IFN-β/IFNB ELISA Kit
二甲基砜(核磁共振定量标准品)Dimethyl sulfone质量规格:核磁共振定量标准品 组蛋白H3-K18乙酰化检测试剂盒10/20等 HumanAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 人血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
1,3-(标准品)1,3-Propanediol质量规格:分析标准品 MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISA试剂盒小鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒规格:96T/48T humanpapillomavirusIgG,HPV-IgGELISA试剂盒人状瘤病毒抗体IgG(HPV-IgG)ELISA试剂盒规格:96T/48T
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上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂等为一体的科研产品销售企业,公司自成立以来,秉承""全心全意服务于科研工作者""的企业理念,立足生物科技领域,运用生物技术和科研试剂,发展现代生物科技,为各类大中小医院及其它医疗机构、高等院校、科研院所、企事业单位提供优质的产品,服务生物科技领域的科学研究人员。
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