参数规格:
产品名称:组织胞浆菌通用PCR检测试剂盒
型号 : EY00P590
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
![4.png 4.png](https://www.chemicalbook.com/SupplyImg/2022-12-14/6380662532758413472732568.jpg)
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
非洲绿猴肾细胞;VERO-76 恶性胚胎横纹肌瘤,RD细胞 KP-N-NS(肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移))α-D-葡萄糖-1-1酸-二钠(>99.0%,BR)质量规格:>99.0%,BRalpha-D-Glucose-1-phosphate, di salt, hydrate
EB病毒转化的B细胞;KMY0926α-甲基肉桂酸(>98%,BR)质量规格:>98%,BRalpha-Methylcinnamic
FLRT3 Others Human FLRT3 细胞裂解液 (阳性对照) 来那度胺/雷利度胺质量规格:>99.0%,BRLenalidomide
CM-R069大鼠肾成纤维细胞完全培养基100mL来那度胺/雷利度胺(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Lenalidomide
CLEC7A Others Human CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 细胞裂解液 (阳性对照) 来曲唑质量规格:>98%,BR,可用于细胞培养Letrozole
组织胞浆菌通用PCR检测试剂盒伏格列波糖质量规格:>99%,BRVoglibose 人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA检测试剂盒HumanLactoferrin,LTF/LFELISAkit 96T/48T HumanBence-Jonesprotein,BJPELISA试剂盒人本周蛋白(BJP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
伏格列波糖(标准品)质量规格:HPLC>99%,标准品Voglibose 大鼠生长抑素(SS)试剂盒 Rat Somatostatin,SS ELISA Kit Humanc-sisELISAKit人c-sisELISA试剂盒规格:96T/48T
头孢硫脒;先锋霉素18号质量规格:>97%,BRCefathiamidine 英文名称RatHeatShockProtein40ELISAKit大鼠热休克蛋白40(HSP40)规格:96T/48T 人Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
D-丝氨酸质量规格:>98%,BRH-D-Ser-OH 活化凝血因子9(FACTORIXa)活性荧光定量检测试剂盒20 兔S100-A5蛋白(S100A5)试剂盒 Rabbit Protein S100-A5,S100A5 ELISA kit
茜素黄R钠盐Alizarin yellow R , salt质量规格:Ind Grade 鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA检测试剂盒ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 96T/48T ELISAKitCCK小鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽规格:48T/96T
D-阿洛糖(>98%,BR)ALL, D-Allose质量规格:>98%,BR 人5羟色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)抗体(IgM)试剂盒 Human 5-hydroxyyptamine/serotonin(5HT/ST)aibody(IgM)ELISA kit Human1,25-dihydroxyvitaminD3,DVD/DHVD3ELISAKit人1,25二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
α-D-葡萄糖-1-1酸-二钠(>99.0%,BR)alpha-D-Glucose-1-phosphate, di salt, hydrate质量规格:>99.0%,BR 英文名称MouseIL-10ELISAKIT小鼠白介素10(IL-10)ELISAKIT规格:96T/48T 人抗纺锤体抗体(MSA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
α-甲基肉桂酸(>98%,BR)alpha-Methylcinnamic 质量规格:>98%,BR 冰冻切片组织CDK2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 小鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)试剂盒 Mouse maix metalloproteinase 8/Neuophil collagenase,MMP-8 ELISA kit
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上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂等为一体的科研产品销售企业,公司自成立以来,秉承""全心全意服务于科研工作者""的企业理念,立足生物科技领域,运用生物技术和科研试剂,发展现代生物科技,为各类大中小医院及其它医疗机构、高等院校、科研院所、企事业单位提供优质的产品,服务生物科技领域的科学研究人员。
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