服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 规格 | 型号 |
封闭毛细线虫PCR检测试剂盒 | 50T | EY00P267 |
组成及试剂配制
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
![4.png 4.png](https://www.chemicalbook.com/SupplyImg/2022-12-14/6380662532758413472732568.jpg)
实验外包
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
小鼠肾足细胞;Mouse podocyte蟛蜞菊内脂;蟛蜞菊内酯(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Wedelolactone
TNFRSF9 Others Canine 狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 细胞裂解液 (阳性对照) 甜橙黄酮质量规格:HPLC≥98%,标准品Sinensetin
CM-M005小鼠气管平滑肌细胞完全培养基100mL白屈菜碱(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Chelidonine
KYSE 450细胞,食管鳞癌 神经胶质瘤细胞,CRT细胞 家兔肾细胞;RABK3葫芦素D;葫芦苦素D质量规格:HPLC≥98%,标准品Cucurbitacin D
CCL-149(大鼠肺泡上皮细胞) 5×106cells/瓶×2甲硝唑杂质A(2-甲基-5-硝基咪唑)标准品质量规格:检查2-Methyl-5-nitroimidazole
黄连碱(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Coptisine CLIAKitforVCAM-1/CD106(HumanVascuolarcelladhesionmolecule1)ELISAkit人血管内皮细胞粘附分子1规格:48T/96T 大鼠细胞间粘附分子2(ICAM-2)ELISA试剂盒 ,英文名: ICAM-2 ELISA Kit
缓激肽(1-5)质量规格:>95%,BRBradykinin (1-5) 组化AP-PNPP底物显色定量试剂盒50 人谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)ELISA检测试剂盒HumanGlathioneperoxidase,GSH-PxELISAKit 96T/48T
缓激肽(1-6)质量规格:>95%,BRBradykinin (1-6) ELISAKitLptn/LTN/XCL1人细胞趋化因子规格:48T/96T 大鼠Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)试剂盒 Rat procollagen Ⅰ N-terminal peptide,PⅠNP ELISA Kit
缓激肽(1-7)质量规格:>95%,BRBradykinin (1-7) 小鼠CD163分子(CD163) Elisa试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 RSVIgG合胞病毒IgG(间接法二步法)
封闭毛细线虫PCR检测试剂盒十二烷基磺酸钠(BR) dodecanesulfonate质量规格:>98%,BR 小鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)ELISA试剂盒 ,英文名: PDGF-BB ELISA Kit ELISAKitHIS小鼠组胺规格:48T/96T
茶碱Theophylline质量规格:>99%,BR 小鼠胃蛋白酶(Pepsin)ELISA检测试剂盒MousePepsinELISAKit 96T/48T Humancostimulatorymoleculesrecptor,CMRELISAKit人协同刺激分子受体(CMR)ELISA试剂盒规格:96T/48T
纤维素酶Cellulase质量规格:>2000U/mg 人激素敏感性脂肪酶(HSL)试剂盒 Human hormone sensitive lipase,HSL ELISA Kit 人上皮特异性抗原(ESA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
硫酸软骨素Chondroitin sulfate质量规格:>95%,BR Ratcalcium/calmodulin-dependeproteinkinase-Ⅱ,CAMK2ELISAKit大鼠钙/钙调素依赖性蛋白激酶2(CAMK2)ELISA试剂盒规格:96T/48T 小鼠乙酰辅酶A 试剂盒 mouse acetyl-CoA ELISA Kit
使用方法:
一、样品DNA的制备用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水(*用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
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