参数规格:
产品名称:五日热巴尔通体PCR检测试剂盒
型号 : EY00P158
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
![5.jpg 5.jpg](https://www.chemicalbook.com/SupplyImg/2022-12-13/6380652530488316355856037.jpg)
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
去氢钩藤碱(标准品)Corynoxeine质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠信号素7A(SEMA7A)ELISA试剂盒 ,英文名: SEMA7A ELISA Kit 小鼠胃肠癌标志物CA199ELISAKit小鼠胃肠癌标志物CA199ELISAKit,48T/96T小鼠胃肠癌标志物CA199ELISAKit,48T/96T规格:48T/96T
去氢木香内酯(标准品)Dehydrocostus Lactone质量规格:HPLC≥98%,标准品 兔肾素(Renin)ELISA检测试剂盒RabbieninELISAKit 96T/48T HumanBreastandkidneyexpressedchemokine,BRAKELISAKit人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA试剂盒规格:96T/48T
染料木苷(标准品)Genistin质量规格:HPLC≥98%,标准品 牛组胺(HIS)试剂盒 Bovine histamine,HIS ELISA kit 人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
去甲乌药碱盐酸盐Higenamine 质量规格:>98%,BR 英文名称HumanVIII-AgELISAKit人凝血因子VIII相关抗原(VIII-Ag)规格:96T/48T 小鼠脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)试剂盒 Mouse Dehydroepiandrosterone sulfate,DHEA-S ELISA Kit
五日热巴尔通体PCR检测试剂盒鸟苷-5'-三1酸二钠盐GTP.Na2质量规格:>95%,BR 大鼠骨特异性碱性1酸酶B(ALP-B)ELISA检测试剂盒RatBone-specificAlkphaseB,ALP-BELISAKit 96T/48T Human3-Niotyrosine,3-ELISA试剂盒人3-硝基酪氨酸(3-)ELISA试剂盒规格:96T/48T
4,4'-二正辛氧基氧化偶氮苯(>95.0%(N))4,4'-Di-n-octyloxyazoxybenzene质量规格:>95.0%(N) 人成纤维细胞生长因子10(FGF10)试剂盒 Human FGF10 ELISA Kit HumanAi-myocardialaibody,AMAELISAKit人抗心肌抗体(AMA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
4,4'-二壬氧基氧化偶氮苯4,4'-Dinonyloxyazoxybenzene质量规格: Rattarate-resistaphosphatase5b,ACP-5bELISAKit大鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP-5b)ELISA试剂盒规格:96T/48T 人白介素6(IL-6)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
4'-(反-4-戊基环己基)二苯基-4-甲腈(>98.0%(GC))4'-(trans-4-Amylcyclohexyl)biphenyl-4-carbonitrile质量规格:>98.0%(GC) JNK/SAPK蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 兔子神经营养因子3(-3)试剂盒 Rabbit neuroophin 3,-3 ELISA Kit
双甲脒Amitraz质量规格:>97%,BR 小鼠红细胞生成素受体(EPOR)ELISA检测试剂盒MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 96T/48T ELISAKitLDL-IC小鼠低密度脂蛋白复合物规格:48T/96T
柠檬酸一水Citric monohydrate质量规格:>99%,AR 人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)试剂盒 Human cytokeratin High Molecular Weight,CK-HMW ELISA Kit Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2ELISAKit人11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
SalubrinalSalubrinal质量规格:>98%,eIF2α选择性抑制剂 RatHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA试剂盒规格:96T/48T 人抗副流感病毒IgG抗体(ai-PIV IgG )ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
磺胺(标准品)Sulfanilamide质量规格:熔点测定 BJ5183-AD-1钙转感受态细菌100微升 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)试剂盒 Mouse tissue inhibitors of metalloproteinase 3,TIMP-3 ELISA kit
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上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂等为一体的科研产品销售企业,公司自成立以来,秉承""全心全意服务于科研工作者""的企业理念,立足生物科技领域,运用生物技术和科研试剂,发展现代生物科技,为各类大中小医院及其它医疗机构、高等院校、科研院所、企事业单位提供优质的产品,服务生物科技领域的科学研究人员。
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