碧云天生产的BJ5183超级感受态细胞,英文名BJ5183 Super Competent Cells,是一种专用于制备重组腺病毒质粒的E. coli BJ5183即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达5×108cfu/μg DNA以上。
腺病毒载体被广泛用于基因 ,然而腺病毒基因组长达45kb,难以进行试管内分子操作。常用的策略是把目的基因构建至穿梭质粒(Shuttle vector)后,共转该穿梭质粒和带有腺病毒骨架载体(Adenoviral backbone vector)至细胞内,再以同源重组的方式将目的基因引入腺病毒载体。BJ5183菌株提供了两个载体同源重组的必需元件,可高效制备并扩增超螺旋状的重组腺病毒质粒。
BJ5183菌株的基因型为endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)。其中sbcBC和recBC的双重突变,赋予其较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒质粒的重组;endA1突变有利于质粒DNA的稳定[1];StrR使得该细胞具有硫酸链霉素抗性。
保存条件:
-80℃保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。
注意事项:
感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。
感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞的转化效率。
待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。
感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。
感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。
通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。
本产品 于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或 ,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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